| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 文献综述与研究目的 | 第13-20页 |
| 1.1 烟粉虱及其危害概述 | 第13-14页 |
| 1.1.1 烟粉虱概述 | 第13-14页 |
| 1.1.2 烟粉虱的危害 | 第14页 |
| 1.2 刺吸式昆虫唾液的组成与功能 | 第14-16页 |
| 1.2.1 胶状唾液 | 第15页 |
| 1.2.2 水状唾液 | 第15-16页 |
| 1.3 昆虫调控植物防御反应研究进展 | 第16-17页 |
| 1.4 互作蛋白的筛选和验证 | 第17-18页 |
| 1.4.1 酵母双杂交系统概述 | 第17-18页 |
| 1.4.2 蛋白互作的验证 | 第18页 |
| 1.5 本研究的目的与主要内容 | 第18-20页 |
| 1.5.1 研究目的 | 第18-19页 |
| 1.5.2 主要内容 | 第19-20页 |
| 2 基本材料和方法 | 第20-29页 |
| 2.1 基本材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 供试昆虫、种群维持方法及初羽化烟粉虱的获得 | 第20页 |
| 2.1.2 供试植物 | 第20-21页 |
| 2.1.3 生态学研究相关仪器设备 | 第21-22页 |
| 2.1.4 分子生物学及生物化学相关主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.1.5 主要化学试剂 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-29页 |
| 2.2.1 烟粉虱总DNA提取 | 第23页 |
| 2.2.2 烟粉虱隐存种的鉴定 | 第23-25页 |
| 2.2.3 烟粉虱总RNA的提取与cDNA的获得 | 第25页 |
| 2.2.4 酶切产物的割胶回收 | 第25页 |
| 2.2.5 载体连接、转化、菌落PCR鉴定与质粒提取 | 第25-26页 |
| 2.2.6 重组质粒导入根癌农杆菌及植物接种 | 第26-27页 |
| 2.2.7 烟草总RNA的提取与cDNA的获得 | 第27-28页 |
| 2.2.8 定量PCR | 第28页 |
| 2.2.9 数据分析 | 第28-29页 |
| 3 烟草中与烟粉虱Bt56蛋白互作蛋白的筛选与验证 | 第29-42页 |
| 3.1 材料与方法 | 第29-35页 |
| 3.1.1 供试昆虫与植物 | 第29页 |
| 3.1.2 主要仪器和试剂 | 第29页 |
| 3.1.3 烟草cDNA文库的构建 | 第29页 |
| 3.1.4 诱饵载体PGBKT7-56的构建 | 第29-30页 |
| 3.1.5 诱饵载体PGBKT7-56转化酵母Y2H Gold菌株及诱饵蛋白自激活验证 | 第30-31页 |
| 3.1.6 酵母双杂交筛选与诱饵蛋白Bt56互作的烟草蛋白 | 第31页 |
| 3.1.7 GST Pull-down互作验证 | 第31-32页 |
| 3.1.8 NTH202系统发育分析在植物体内表达位置 | 第32页 |
| 3.1.9 Bt56和NTH202共定位 | 第32页 |
| 3.1.10 免疫印迹试验及考马斯亮蓝法检测目的蛋白 | 第32页 |
| 3.1.11 BIFC互作验证 | 第32-33页 |
| 3.1.12 本章实验所用引物 | 第33-35页 |
| 3.2 结果与分析 | 第35-41页 |
| 3.2.1 PGBKT7-56筛库结果 | 第35页 |
| 3.2.2 互作验证 | 第35-38页 |
| 3.2.3 GST Pull-down验证互作蛋白与PGBKT7-56的体外互作 | 第38-39页 |
| 3.2.4 双分子荧光互补(BiFC)验证NTH202与Bt56在植物中的互作 | 第39-41页 |
| 3.3 讨论与小结 | 第41-42页 |
| 4 烟粉虱唾液蛋白Bt56靶向NTH202调控植物水杨酸机制探究 | 第42-53页 |
| 4.1 材料与方法 | 第42-46页 |
| 4.1.1 供试昆虫与植物 | 第42页 |
| 4.1.2 主要仪器和试剂 | 第42页 |
| 4.1.3 激光捕获显微切割(LCM)和韧皮部汁液收集 | 第42-43页 |
| 4.1.4 病毒介导的基因沉默(VIGS)沉默烟草NTH202基因 | 第43页 |
| 4.1.5 qPCR验证烟草沉默效率 | 第43-44页 |
| 4.1.6 烟粉虱危害及烟草中过表达Bt56对NTH202基因表达量的影响 | 第44页 |
| 4.1.7 烟粉虱在沉默NTH202基因后的烟草上的生物学测定 | 第44页 |
| 4.1.8 植物激素含量测定 | 第44-45页 |
| 4.1.9 本章实验所用引物 | 第45-46页 |
| 4.2 结果与分析 | 第46-51页 |
| 4.2.1 验证NTH202与Bt56在植物的韧皮部互作 | 第46-47页 |
| 4.2.2 烟粉虱取食烟草对烟草NTH202基因表达量的影响 | 第47-48页 |
| 4.2.3 烟粉虱在沉默NTH202基因烟草上的生物学测定 | 第48-50页 |
| 4.2.4 沉默NTH202基因对烟草SA防御反应途径的影响 | 第50-51页 |
| 4.3 讨论与小结 | 第51-53页 |
| 5 总讨论 | 第53-55页 |
| 5.1 全文总结 | 第53-54页 |
| 5.2 本研究的特色之处 | 第54页 |
| 5.3 本研究的不足之处以及值得继续研究的问题 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 作者简介 | 第64页 |
