| 摘要 | 第10-14页 |
| ABSTRACT | 第14-18页 |
| 缩略词 | 第19-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-50页 |
| 1. 微生物的乳酸代谢 | 第20-26页 |
| 1.1 微生物乳酸代谢相关蛋白 | 第20-22页 |
| 1.2 乳酸分解代谢涉及的关键酶 | 第22-26页 |
| 2. 乳酸代谢对微生物致病性的影响 | 第26-30页 |
| 2.1 乳酸代谢对奈瑟氏菌致病性的影响 | 第26-28页 |
| 2.2 乳酸代谢对其他病原微生物致病性的影响 | 第28-30页 |
| 3. 微生物乳酸代谢的调控 | 第30-32页 |
| 3.1 LldR调控蛋白及其对乳酸代谢的阻遏调控机制 | 第30-31页 |
| 3.2 LysR型调控蛋白及其对乳酸代谢的调控 | 第31-32页 |
| 4. 乳酸脱氢酶在生物催化方面的应用研究 | 第32-36页 |
| 4.1 乳酸脱氢酶在光学纯2-羟基羧酸生产方面的应用 | 第33-35页 |
| 4.2 乳酸脱氢酶在酮基羧酸生产方面的应用 | 第35-36页 |
| 5. 铜绿假单胞菌与囊性纤维化症 | 第36-37页 |
| 5.1 铜绿假单胞菌 | 第36-37页 |
| 5.2 囊性纤维化症 | 第37页 |
| 6. 论文的立题依据和主要研究内容 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-50页 |
| 第二章 铜绿假单胞菌PAO1中L-乳酸分解代谢机制 | 第50-98页 |
| 1 引言 | 第50页 |
| 2 材料与方法 | 第50-67页 |
| 2.1 实验药品和试剂 | 第50-51页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第51-52页 |
| 2.3 菌株及质粒 | 第52-54页 |
| 2.4 培养基及培养条件 | 第54-56页 |
| 2.5 引物和DNA测序 | 第56-57页 |
| 2.6 LldD和LldA蛋白的克隆,外源表达与纯化 | 第57-58页 |
| 2.7 LldD和LldA酶学性质的测定 | 第58-59页 |
| 2.8 P.aeruginosa PAO1突变菌株及回补菌株的构建 | 第59-61页 |
| 2.9 DCPIP法和Oxytherm液相氧电极测定iLDHs活力 | 第61-62页 |
| 2.10 超速离心法进行iLDH胞内定位 | 第62-63页 |
| 2.11 P.aeruginosa PAO1 iLDHs相关基因转录水平的测定 | 第63-65页 |
| 2.12 共培养P.aeruginosa PAO1和aeruginosa (△lldD & △lldA) | 第65-66页 |
| 2.13 生物膜检测 | 第66-67页 |
| 2.14 分析方法 | 第67页 |
| 3 结果与讨论 | 第67-94页 |
| 3.1 L-乳酸对P.aeruginosa PAO1在SCFM中生长的影响 | 第67-69页 |
| 3.2 P.aeruginosa PAO1中含有两个氧化L-乳酸的酶 | 第69-71页 |
| 3.3 LldD和LldA的纯化与酶学性质鉴定 | 第71-75页 |
| 3.4 LldD和LldA的生理功能研究 | 第75-79页 |
| 3.5 LldD和LldA的亚细胞定位 | 第79页 |
| 3.6 LldD和LldA的表达特征 | 第79-83页 |
| 3.7 LldD和LldA对P.aeruginosa PAO1在CF环境中生存的作用 | 第83-86页 |
| 3.8 L-乳酸代谢对P.aeruginosa在CF环境中生物膜形成的作用 | 第86-90页 |
| 3.9 讨论 | 第90-94页 |
| 4 本章小结 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-98页 |
| 第三章 铜绿假单胞菌新型L-iLDH编码基因lldA的表达调控 | 第98-112页 |
| 1 引言 | 第98页 |
| 2 材料与方法 | 第98-104页 |
| 2.1 实验药品和试剂 | 第98-99页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第99页 |
| 2.3 菌株及质粒 | 第99-101页 |
| 2.4 培养基及培养条件 | 第101页 |
| 2.5 引物和DNA测序 | 第101-102页 |
| 2.6 P.aeruginosa PAO1相关基因敲除菌株及回补菌株的构建 | 第102-103页 |
| 2.7 P.aeruginosa PAO1启动子融合质粒菌株的构建 | 第103页 |
| 2.8 提取细菌总RNA、cDNA合成 | 第103页 |
| 2.9 RT-PCR及qRT-PCR | 第103-104页 |
| 2.10 β-半乳糖苷酶酶活检测 | 第104页 |
| 3 结果与讨论 | 第104-110页 |
| 3.1 PA2383功能的初步鉴定 | 第104-106页 |
| 3.2 PA2383对lldA基因转录表达的调控作用 | 第106-109页 |
| 3.3 L-乳酸在PA2383对lldA基因转录表达调控中的作用 | 第109-110页 |
| 4 本章小结 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-112页 |
| 第四章 改造恶臭假单胞菌乳酸代谢系统拆分生产L-2-羟基羧酸 | 第112-136页 |
| 1 引言 | 第112-113页 |
| 2 材料与方法 | 第113-120页 |
| 2.1 实验药品和试剂 | 第113页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第113-114页 |
| 2.3 菌株及质粒 | 第114-115页 |
| 2.4 培养基与培养条件 | 第115页 |
| 2.5 引物和DNA测序 | 第115-116页 |
| 2.6 P.putida KT2440 L-乳酸脱氢酶LldD的基因敲除与回补 | 第116-118页 |
| 2.7 lldP、lldD及lldE基因的反转录PCR(RT-PCR) | 第118页 |
| 2.8 粗酶液制备及iLDHs酶活测定 | 第118-119页 |
| 2.9 DL-乳酸、DL-羟基丁酸的手性拆分 | 第119-120页 |
| 2.10 HPLC分析2-羟基羧酸和2-酮基羧酸含量及手性 | 第120页 |
| 3 结果与讨论 | 第120-130页 |
| 3.1 P.putida KT2440乳酸代谢操纵子的分析与鉴定 | 第120-122页 |
| 3.2 P.putida KT2440乳酸代谢系统的改造 | 第122-124页 |
| 3.3 P.putida KT2440和P.putida KTM对DL-乳酸的利用情况 | 第124-126页 |
| 3.4 P.putida KTM中D-iLDH的底物特异性及动力学参数 | 第126-127页 |
| 3.5 P.putida KTM全细胞拆分生产L-2-羟基羧酸 | 第127-129页 |
| 3.6 讨论 | 第129-130页 |
| 4 本章小结 | 第130-131页 |
| 参考文献 | 第131-136页 |
| 第五章 利用甘油为廉价碳源制备生物催化剂高效生产2-酮基羧酸 | 第136-158页 |
| 1 引言 | 第136-137页 |
| 2 材料与方法 | 第137-141页 |
| 2.1 实验药品和试剂 | 第137页 |
| 2.2 主要仪器设备 | 第137-138页 |
| 2.3 菌株及质粒 | 第138-139页 |
| 2.4 培养基及培养条件 | 第139页 |
| 2.5 引物和DNA测序 | 第139-140页 |
| 2.6 P.putida KT2440乳酸操纵子调控蛋白LldR的基因敲除 | 第140页 |
| 2.7 外源表达VHb | 第140-141页 |
| 2.8 粗酶液制备及iLDHs酶活测定 | 第141页 |
| 2.9 以甘油作为碳源制备全细胞催化剂生产2-酮基羧酸 | 第141页 |
| 2.10 HPLC分析2-羟基羧酸和2-酮基羧酸含量 | 第141页 |
| 3 结果与讨论 | 第141-154页 |
| 3.1 P.putida KT2440乳酸代谢和甘油代谢调控系统的分析 | 第141-145页 |
| 3.2 P.putida KT2440 lldR敲除菌株的构建 | 第145-146页 |
| 3.3 验证敲除lldR对iLDHs表达产生的影响 | 第146-148页 |
| 3.4 VHb的表达对iLDHs氧化乳酸的活力的影响 | 第148-150页 |
| 3.5 引入VHb对全细胞催化活力的影响 | 第150-151页 |
| 3.6 利用全细胞催化法生产丙酮酸和2-酮基丁酸 | 第151-153页 |
| 3.7 讨论 | 第153-154页 |
| 4 本章小结 | 第154-155页 |
| 参考文献 | 第155-158页 |
| 结束语 | 第158-160页 |
| 附录 | 第160-164页 |
| 致谢 | 第164-166页 |
| 攻读博士期间论文发表情况 | 第166-168页 |
| 附表 | 第168页 |
