| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 引言 | 第14-26页 |
| 1.1 细菌的群体感应系统 | 第14-17页 |
| 1.1.1 革兰氏阴性菌的LuxI/LuxR系统 | 第14-15页 |
| 1.1.2 革兰氏阳性菌的双组分群体感应系统 | 第15-16页 |
| 1.1.3 LuxS/AI-2依赖的群体感应系统 | 第16页 |
| 1.1.4 其他的QS系统 | 第16页 |
| 1.1.5 群体感应与病原菌致病性 | 第16-17页 |
| 1.2 嗜水气单胞菌的群体感应系统 | 第17-20页 |
| 1.2.1 嗜水气单胞菌简介 | 第17-18页 |
| 1.2.2 嗜水气单胞菌的群体感应系统 | 第18-19页 |
| 1.2.3 嗜水气单胞菌的毒力因子 | 第19-20页 |
| 1.2.4 嗜水气单胞菌的生物被膜 | 第20页 |
| 1.3 群体感应淬灭酶 | 第20-25页 |
| 1.3.1 群体感应淬灭 | 第20-21页 |
| 1.3.2 AHL内酯酶 | 第21-24页 |
| 1.3.3 AHLs酰化酶 | 第24-25页 |
| 1.3.4 AHLs氧化还原酶 | 第25页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第25-26页 |
| 第二章 地衣芽孢杆菌(B.licheniformis)T-1的ytnP基因全长的克隆及分析 | 第26-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第26-27页 |
| 2.1.2 试剂与工具酶 | 第27页 |
| 2.1.3 缓冲液和培养基 | 第27页 |
| 2.1.4 引物合成 | 第27页 |
| 2.1.5 主要实验仪器 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-30页 |
| 2.2.1 地衣芽孢杆菌T-1基因组的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.2 ytnP扩增引物的设计 | 第28页 |
| 2.2.3 ytnP的全长克隆 | 第28-29页 |
| 2.2.4 ytnP序列的生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-36页 |
| 2.3.1 地衣芽孢杆菌T-1基因组提取 | 第30页 |
| 2.3.2 地衣芽孢杆菌T-1ytnP基因的全长克隆 | 第30-31页 |
| 2.3.3 ytnP序列的生物信息学分析 | 第31-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 ytnP的原核表达,纯化与酶活测定 | 第38-58页 |
| 3.1 实验材料 | 第38-41页 |
| 3.1.1 菌株与质粒 | 第38页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第38-39页 |
| 3.1.3 溶液配置 | 第39-40页 |
| 3.1.4 引物合成 | 第40页 |
| 3.1.5 主要实验仪器 | 第40-41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-47页 |
| 3.2.1 大肠杆菌表达载体pEASY-BluntE1-ytnP的构建 | 第41-42页 |
| 3.2.2 ytnP在大肠杆菌中的表达与检测 | 第42-44页 |
| 3.2.3 重组酶YtnP的纯化 | 第44-45页 |
| 3.2.4 重组酶YtnP的透析复性 | 第45-46页 |
| 3.2.5 BCA蛋白定量测定蛋白浓度 | 第46页 |
| 3.2.6 YtnP活性测定 | 第46-47页 |
| 3.2.7 Ytnp的酶活测定 | 第47页 |
| 3.3 结果与分析 | 第47-56页 |
| 3.3.1 高保真酶克隆ytnP | 第47-49页 |
| 3.3.2 重组酶YtnP在大肠杆菌中的表达鉴定 | 第49-51页 |
| 3.3.3 YtnP的纯化 | 第51-53页 |
| 3.3.4 YtnP的透析复性 | 第53-54页 |
| 3.3.5 BCA测定蛋白浓度 | 第54页 |
| 3.3.6 YtnP酶活测定 | 第54-56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 YtnP对嗜水气单胞菌生物膜的影响 | 第58-68页 |
| 4.1 实验材料 | 第58-59页 |
| 4.1.1 菌株 | 第58-59页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第59页 |
| 4.1.3 培养基 | 第59页 |
| 4.1.4 仪器设备 | 第59页 |
| 4.2 实验方法 | 第59-61页 |
| 4.2.1 YtnP的制备 | 第59页 |
| 4.2.2 嗜水气单胞菌初始浓度对生物膜形成的影响 | 第59-60页 |
| 4.2.3 YtnP对嗜水气单胞菌生物膜的抑制作用 | 第60页 |
| 4.2.4 4种抗生素对嗜水气单胞菌最小抑菌浓度(Minimal Inhibit Concentration,MIC)的测定 | 第60页 |
| 4.2.5 YtnP和抗生素协同作用对嗜水气单胞菌MIC的影响 | 第60页 |
| 4.2.6 数据处理 | 第60-61页 |
| 4.3 结果与分析 | 第61-66页 |
| 4.3.1 不同浓度的嗜水气单胞菌对其生物膜形成的影响 | 第61页 |
| 4.3.2 YtnP对嗜水气单胞菌生物膜的抑制作用 | 第61-63页 |
| 4.3.3 4种抗生素对嗜水气单胞菌的MIC测定结果 | 第63页 |
| 4.3.4 YtnP与抗生素的协同作用对嗜水气单胞菌MIC的影响 | 第63-66页 |
| 4.4 讨论 | 第66-68页 |
| 第五章 YtnP对嗜水气单胞菌毒力因子表达调控研究 | 第68-83页 |
| 5.1 材料与方法 | 第68-69页 |
| 5.1.1 实验菌株和实验用鱼 | 第68-69页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第69页 |
| 5.1.3 溶液 | 第69页 |
| 5.1.4 主要仪器 | 第69页 |
| 5.2 实验方法 | 第69-73页 |
| 5.2.1 细菌生长曲线绘制 | 第69-70页 |
| 5.2.2 细菌RNA的提取 | 第70页 |
| 5.2.3 细菌RNA质量的检测 | 第70页 |
| 5.2.4 细菌RNA的反转录 | 第70-71页 |
| 5.2.5 荧光定量PCR检测毒力基因表达 | 第71-72页 |
| 5.2.6 溶血活性测定 | 第72页 |
| 5.2.7 YtnP对异育银鲫(C.auratusgibelio)的保护实验 | 第72-73页 |
| 5.2.8 数据分析 | 第73页 |
| 5.3 结果与分析 | 第73-80页 |
| 5.3.1 嗜水气单胞菌生长曲线 | 第73-74页 |
| 5.3.2 荧光定量引物验证 | 第74页 |
| 5.3.3 添加YtnP对嗜水气单胞菌毒力基因表达量的影响 | 第74-78页 |
| 5.3.4 溶血活性测定 | 第78-79页 |
| 5.3.5 重组酶YtnP对异育银鲫的保护实验 | 第79-80页 |
| 5.4 讨论 | 第80-83页 |
| 全文总结 | 第83页 |
| 展望 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
