| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第9-20页 |
| 1.1 柚苷酶概述 | 第9-12页 |
| 1.1.1 柚苷酶简介 | 第9页 |
| 1.1.2 柚苷酶的作用机理 | 第9-10页 |
| 1.1.3 柚苷酶的应用 | 第10-12页 |
| 1.1.3.1 柑橘类果汁脱苦 | 第10-11页 |
| 1.1.3.2 生产鼠李糖和普鲁宁 | 第11页 |
| 1.1.3.3 制备抗生素 | 第11页 |
| 1.1.3.4 酒类增香 | 第11页 |
| 1.1.3.5 生物转化类固醇 | 第11-12页 |
| 1.2 柚苷酶生产菌种的研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2.1 柚苷酶生产菌种及来源 | 第12-13页 |
| 1.2.2 柚苷酶生产菌种的筛选方法 | 第13-14页 |
| 1.2.2.1 透明圈法 | 第13-14页 |
| 1.2.2.2 定性滤纸显色法 | 第14页 |
| 1.2.2.3 半固体培养基高层试管法 | 第14页 |
| 1.3 柚苷酶发酵工艺概述 | 第14-15页 |
| 1.3.1 固态发酵法 | 第14-15页 |
| 1.3.2 液态发酵法 | 第15页 |
| 1.4 柚苷酶活力的检测方法 | 第15-16页 |
| 1.4.1 Davis分光光度法 | 第15-16页 |
| 1.4.2 高效液相色谱法 | 第16页 |
| 1.4.3 对硝基苯酚分光光度法 | 第16页 |
| 1.5 热激在生物学研究中的应用 | 第16-18页 |
| 1.5.1 热激在动物研究中的应用 | 第17页 |
| 1.5.2 热激在植物研究中的应用 | 第17-18页 |
| 1.5.3 热激在微生物研究中的应用 | 第18页 |
| 1.6 本论文的研究意义及主要内容 | 第18-20页 |
| 1.6.1 研究意义 | 第18-19页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第19-20页 |
| 第二章 高产柚苷酶菌株的筛选及发酵工艺研究 | 第20-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第20页 |
| 2.1.2 实验试剂及设备 | 第20-21页 |
| 2.1.3 培养基 | 第21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-23页 |
| 2.2.1 单孢子悬液的制备 | 第21-22页 |
| 2.2.2 种子液的制备 | 第22页 |
| 2.2.3 柚苷酶活性的测定 | 第22页 |
| 2.2.4 数据分析 | 第22页 |
| 2.2.5 高产柚苷酶菌株的筛选 | 第22页 |
| 2.2.6 高产柚苷酶菌株的发酵工艺研究 | 第22-23页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第23-27页 |
| 2.3.1 高产柚苷酶菌株的筛选 | 第23-25页 |
| 2.3.1.1 柚皮苷标准曲线的测定 | 第23-24页 |
| 2.3.1.2 高产柚苷酶菌株的筛选 | 第24-25页 |
| 2.3.2 高产柚苷酶菌株的发酵工艺研究 | 第25-27页 |
| 2.3.2.1 发酵时间的确定 | 第25页 |
| 2.3.2.2 接种量的确定 | 第25-26页 |
| 2.3.2.3 初始pH的确定 | 第26-27页 |
| 2.3.2.4 碳源种类的确定 | 第27页 |
| 2.4 实验小结 | 第27-28页 |
| 第三章 热激促进黑曲霉发酵产柚苷酶的工艺研究及有机酸分析 | 第28-39页 |
| 3.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 3.1.1 实验菌株 | 第28页 |
| 3.1.2 实验主要试剂及设备 | 第28-29页 |
| 3.1.3 培养基 | 第29页 |
| 3.2 实验方法 | 第29-31页 |
| 3.2.1 单孢子悬液的制备 | 第29页 |
| 3.2.2 种子液的制备 | 第29-30页 |
| 3.2.3 柚苷酶活性的测定 | 第30页 |
| 3.2.4 生物量的测定 | 第30页 |
| 3.2.5 pH值的测定 | 第30页 |
| 3.2.6 数据分析 | 第30页 |
| 3.2.7 热激促进黑曲霉发酵产柚苷酶的工艺研究 | 第30-31页 |
| 3.2.8 热激促进黑曲霉发酵产柚苷酶的有机酸分析 | 第31页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第31-38页 |
| 3.3.1 热激促进黑曲霉发酵产柚苷酶的工艺研究 | 第31-36页 |
| 3.3.1.1 热激温度的确定 | 第31-32页 |
| 3.3.1.2 热激时机的确定 | 第32-33页 |
| 3.3.1.3 热激时长的确定 | 第33-34页 |
| 3.3.1.4 热激次数的确定 | 第34-36页 |
| 3.3.1.5 验证实验 | 第36页 |
| 3.3.2 热激促进黑曲霉发酵产柚苷酶的有机酸分析 | 第36-38页 |
| 3.4 实验小结 | 第38-39页 |
| 第四章 热激促进黑曲霉发酵产柚苷酶的基因表达量分析 | 第39-48页 |
| 4.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 4.1.1 实验菌株 | 第39页 |
| 4.1.2 实验试剂及设备 | 第39-40页 |
| 4.1.3 培养基 | 第40页 |
| 4.2 实验材料 | 第40-41页 |
| 4.2.1 单孢子悬液的制备 | 第40页 |
| 4.2.2 种子液的制备 | 第40页 |
| 4.2.3 引物 | 第40-41页 |
| 4.3 实验方法 | 第41-42页 |
| 4.3.1 黑曲霉菌株的菌体收集 | 第41页 |
| 4.3.2 黑曲霉菌株的总RNA提取 | 第41页 |
| 4.3.3 黑曲霉菌株总RNA的逆转录反应 | 第41页 |
| 4.3.4 黑曲霉菌株中α-L-鼠李糖苷酶cDNA部分片段克隆 | 第41-42页 |
| 4.3.5 实时定量PCR检测基因的表达量 | 第42页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第42-47页 |
| 4.4.1 黑曲霉菌株总RNA的提取与检测 | 第42-43页 |
| 4.4.2 黑曲霉菌株中α-L-鼠李糖苷酶cDNA部分片段克隆 | 第43-44页 |
| 4.4.3 引物质量检测 | 第44-45页 |
| 4.4.4 黑曲霉菌株中RHA的表达情况 | 第45-47页 |
| 4.5 实验小结 | 第47-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
