| 中文摘要 | 第4-8页 |
| abstract | 第8-13页 |
| 第1章 绪论 | 第20-36页 |
| 1.1 引言 | 第20-22页 |
| 1.2 免疫系统人源化小鼠的发展 | 第22-23页 |
| 1.2.1 Hu-PBL-SCID | 第22页 |
| 1.2.2 SCID-hu | 第22页 |
| 1.2.3 Hu-SRC-SCID(humanscidrepopulatingcellSCID) | 第22-23页 |
| 1.2.4 hu-BLT-SCID(humanbone-liver-thymusSCID) | 第23页 |
| 1.3 免疫系统人源化小鼠的应用 | 第23-25页 |
| 1.3.1 HIV和EBV感染研究 | 第23-24页 |
| 1.3.2 癌症研究 | 第24页 |
| 1.3.3 自身免疫疾病 | 第24-25页 |
| 1.4 人肝嵌合小鼠的发展 | 第25-26页 |
| 1.4.1 uPA/SCID转基因小鼠 | 第25页 |
| 1.4.2 FRG(Fah~（-/-）Rag2~（-/-）rc~（-/-）)基因缺陷小鼠 | 第25页 |
| 1.4.3 TK-NOG转基因小鼠 | 第25-26页 |
| 1.5 人肝嵌合小鼠的应用 | 第26-30页 |
| 1.5.1 肝炎病毒、疟原虫感染与治疗 | 第26-29页 |
| 1.5.2 药物代谢研究 | 第29-30页 |
| 1.6 肝-免疫人源化小鼠的发展及应用 | 第30-32页 |
| 1.6.1 AFC8-huHEP/HSC小鼠 | 第30页 |
| 1.6.2 A2/NSG-huHSC/Hep | 第30-31页 |
| 1.6.3 HIL(human-immune-liver)小鼠 | 第31页 |
| 1.6.4 HIS-Hep小鼠 | 第31-32页 |
| 1.6.5 异源人肝脏细胞与免疫系统重建的人源化小鼠 | 第32页 |
| 1.7 肝脏免疫系统概述 | 第32-34页 |
| 1.8 本课题立题依据 | 第34-36页 |
| 第2章 人胚胎肝脏细胞在免疫缺陷小鼠肝脏中重建 | 第36-54页 |
| 2.1 前言 | 第36-37页 |
| 2.2 实验材料 | 第37-39页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第37页 |
| 2.2.2 人胚胎组织来源 | 第37-38页 |
| 2.2.3 主要实验试剂 | 第38-39页 |
| 2.2.4 主要实验仪器 | 第39页 |
| 2.3 实验方法 | 第39-46页 |
| 2.3.1 Jo2抗体小鼠腹腔注射 | 第39-40页 |
| 2.3.2 小鼠尾静脉采血及血清分离 | 第40页 |
| 2.3.3 小鼠谷丙转氨酶(ALT)检测 | 第40页 |
| 2.3.4 小鼠肝脏组织HE染色 | 第40-41页 |
| 2.3.5 人胚胎肝脏细胞、CD34~+细胞分离及胸腺组织处理 | 第41-42页 |
| 2.3.6 人胚胎肝脏细胞小鼠脾内移植 | 第42页 |
| 2.3.7 ELISA检测人胚胎肝脏细胞移植小鼠血清中人白蛋白.. | 第42-43页 |
| 2.3.8 免疫组化 | 第43-44页 |
| 2.3.9 RNA提取,RT-PCR和qPCR | 第44-46页 |
| 2.4 结果 | 第46-51页 |
| 2.4.1 Jo2诱导NCG小鼠肝损伤模型的建立 | 第46-49页 |
| 2.4.2 人胚胎肝脏细胞在Jo2诱导肝损伤的免疫缺陷小鼠中长期重建 | 第49页 |
| 2.4.3 重建的人肝脏细胞表达肝脏细胞特异的基因 | 第49-51页 |
| 2.5 讨论 | 第51-54页 |
| 第3章 肝-免疫人源化小鼠中人肝脏细胞促进肝脏中人免疫系统的发育 | 第54-72页 |
| 3.1 前言 | 第54-55页 |
| 3.2 实验材料 | 第55-57页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第55页 |
| 3.2.2 人胚胎组织和成人肝组织来源 | 第55页 |
| 3.2.3 实验主要试剂 | 第55-56页 |
| 3.2.4 实验主要仪器 | 第56页 |
| 3.2.5 统计方法 | 第56-57页 |
| 3.3 实验方法 | 第57-60页 |
| 3.3.1 人胚胎肝脏细胞和CD34~+细胞分离,胚胎胸腺组织处理 | 第57页 |
| 3.3.2 免疫系统人源化小鼠的构建 | 第57页 |
| 3.3.3 肝-免疫人源化小鼠的构建 | 第57页 |
| 3.3.4 ELISA | 第57-58页 |
| 3.3.5 免疫组化 | 第58页 |
| 3.3.6 人肝脏细胞和免疫细胞共培养 | 第58页 |
| 3.3.7 流式细胞检测 | 第58页 |
| 3.3.8 多色免疫组化 | 第58-59页 |
| 3.3.9 RNA提取、RT-PCR和qPCR | 第59-60页 |
| 3.3.10 共聚焦显微镜进行图片拍摄 | 第60页 |
| 3.4 结果 | 第60-69页 |
| 3.4.1 人肝脏细胞对肝-免疫人源化小鼠外周血和脾脏中的人免疫系统发育没有影响 | 第60-61页 |
| 3.4.2 人肝脏细胞促进肝-免疫人源化小鼠肝脏中人免疫细胞重建水平 | 第61-63页 |
| 3.4.3 肝-免疫人源化小鼠肝脏中人肝脏细胞区域具有更多的人免疫细胞 | 第63-65页 |
| 3.4.4 体外共培养实验证明人肝脏细胞可以促进人免疫细胞的存活和扩增 | 第65-67页 |
| 3.4.5 重建在小鼠中的人肝脏细胞可以分泌细胞因子和趋化因子 | 第67-69页 |
| 3.5 讨论 | 第69-72页 |
| 第4章 基于uPA的新型免疫缺陷小鼠肝损伤模型的开发 | 第72-96页 |
| 4.1 前言 | 第72-73页 |
| 4.2 实验材料 | 第73-74页 |
| 4.2.1 主要实验试剂 | 第73-74页 |
| 4.2.2 主要实验仪器 | 第74页 |
| 4.2.3 统计方法 | 第74页 |
| 4.3 实验方法 | 第74-80页 |
| 4.3.1 质粒构建 | 第74-75页 |
| 4.3.2 细胞转染及稳转细胞系的筛选 | 第75页 |
| 4.3.3 RNA提取、RT-PCR和qPCR | 第75-76页 |
| 4.3.4 Westernblot | 第76-78页 |
| 4.3.5 uPA酶活性检测 | 第78页 |
| 4.3.6 细胞迁移实验(划痕法) | 第78-79页 |
| 4.3.7 NOD/SCID-uPA-ERT2转基因小鼠的制备与基因型鉴定 | 第79页 |
| 4.3.8 小鼠肝脏细胞的分离、培养、4OH-T处理与uPA酶活性检测 | 第79-80页 |
| 4.3.9 小鼠血清中uPA酶活性检测 | 第80页 |
| 4.4 结果 | 第80-92页 |
| 4.4.1 pcDNA3.1-GFP、pcDNA3.3-uPA、pcDNA3.1-uPA-ERT2质粒的构建和表达验证 | 第80-83页 |
| 4.4.2 4OH-T处理增强4T1-uPA-ERT2细胞系的迁移能力 | 第83-85页 |
| 4.4.3 4OH-T处理提高uPA-ERT2的uPA酶活性 | 第85-87页 |
| 4.4.4 NOD/SCID-uPA-ERT2转基因小鼠基因型鉴定及特点 | 第87-90页 |
| 4.4.5 4OH-T处理提高来源于NOD/SCID-uPA-ERT2小鼠的肝细胞培养上清中uPA的酶活性 | 第90-91页 |
| 4.4.6 他莫昔芬处理提高NOD/SCID-uPA-ERT2小鼠血清中uPA酶活性和ALT水平 | 第91-92页 |
| 4.5 讨论 | 第92-96页 |
| 第5章 结论 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-116页 |
| 攻读博士学位期间科研成果 | 第116-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
