| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-24页 |
| 1.1 WRKY转录调控因子 | 第15-17页 |
| 1.1.1 WRKY转录调控因子的发现 | 第15-16页 |
| 1.1.2 WRKY转录调控因子的结构特征及分类 | 第16-17页 |
| 1.2 水稻WRKY转录调控因子的生物学功能 | 第17-22页 |
| 1.2.1 WRKY在水稻生物胁迫中的调控作用 | 第18-19页 |
| 1.2.2 WRKY在水稻非生物胁迫中的调控作用 | 第19-20页 |
| 1.2.3 WRKY在水稻生长发育中的调节作用 | 第20-21页 |
| 1.2.4 WRKY参与水稻的形态建成 | 第21页 |
| 1.2.5 WRKY与激素信号途径的相互作用 | 第21-22页 |
| 1.3 研究目的与意义 | 第22-24页 |
| 第二章 Os/Om WRKY7-pGEX-4T-1表达载体的构建及原核表达 | 第24-35页 |
| 2.1 实验材料与试剂 | 第24-25页 |
| 2.1.1 菌株 | 第24页 |
| 2.1.2 载体与试剂 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-29页 |
| 2.2.1 Os/Om WRKY7目的基因的CDS序列扩增 | 第25-26页 |
| 2.2.2 双酶切pGEX-4T-1 | 第26-27页 |
| 2.2.3 Infusion同源重组 | 第27-28页 |
| 2.2.4 融合蛋白原核表达的预实验 | 第28-29页 |
| 2.2.5 融合蛋白诱导表达条件的优化 | 第29页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第29-33页 |
| 2.3.1O s/Om WRKY7-pGEX-4T-1载体构建 | 第29-30页 |
| 2.3.2 融合蛋白原核表达的预实验 | 第30-32页 |
| 2.3.3 融合蛋白(OsWRKY7-GST)可溶性表达条件的优化 | 第32-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 应用GST Pull-Down技术筛选Os/OmWRKY7互作蛋白 | 第35-50页 |
| 3.1 实验材料与试剂 | 第35-36页 |
| 3.1.1 材料 | 第35页 |
| 3.1.2 试剂 | 第35-36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-39页 |
| 3.2.1 融合蛋白Os/OmWRKY7的纯化 | 第36-37页 |
| 3.2.2 蛋白浓度的测定 | 第37-38页 |
| 3.2.3 植物组织总蛋白的提取 | 第38页 |
| 3.2.4 GST Pull-Down筛选互作蛋白 | 第38-39页 |
| 3.2.5 数据分析 | 第39页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第39-49页 |
| 3.3.1 融合蛋白OsWRKY7-GST和OmWRKY7-GST的纯化 | 第39-40页 |
| 3.3.2 纯化蛋白的定量 | 第40-41页 |
| 3.3.3 融合蛋白与日本晴叶片总蛋白的Pull-Down | 第41-42页 |
| 3.3.4 差异蛋白分析 | 第42-43页 |
| 3.3.5 差异蛋白的质谱鉴定 | 第43-49页 |
| 3.4 讨论 | 第49-50页 |
| 第四章 应用酵母双杂交技术验证蛋白互作 | 第50-62页 |
| 4.1 实验材料与试剂 | 第50-51页 |
| 4.1.1 载体与菌株 | 第50页 |
| 4.1.2 试剂 | 第50-51页 |
| 4.2 实验方法: | 第51-56页 |
| 4.2.1 Os/OmWRKY7截短蛋白自激活载体的构建 | 第51-52页 |
| 4.2.2 酵母感受态制备 | 第52页 |
| 4.2.3 酵母自激活实验 | 第52-53页 |
| 4.2.4 水稻叶片总RNA提取 | 第53-54页 |
| 4.2.5 cDNA合成 | 第54页 |
| 4.2.6 互作蛋白酵母载体的构建 | 第54-56页 |
| 4.2.7 酵母双杂交验证互作蛋白 | 第56页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第56-60页 |
| 4.3.1 截短蛋白相应DNA序列的克隆 | 第56-57页 |
| 4.3.2 截短蛋白的自激活活性验证 | 第57-58页 |
| 4.3.3 互作蛋白相应CDS序列的克隆 | 第58-59页 |
| 4.3.4 酵母双杂交验证 | 第59-60页 |
| 4.4 讨论 | 第60-62页 |
| 第五章 OsWRKY7基因和Om WRKY7基因的自身互作 | 第62-67页 |
| 5.1 实验材料与试剂 | 第62页 |
| 5.1.1 材料与菌株 | 第62页 |
| 5.1.2 载体与试剂 | 第62页 |
| 5.2 实验方法 | 第62-64页 |
| 5.2.1 OsWRKY7和OmWRKY7的BiFC载体构建 | 第63页 |
| 5.2.2 农杆菌的电击转化 | 第63页 |
| 5.2.3 农杆菌介导的烟草瞬时表达 | 第63-64页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第64-66页 |
| 5.3.1 OsWRKY7和Om WRKY7自身互作载体构建 | 第64-65页 |
| 5.3.2 OsWRKY7和OmWRKY7的自身互作 | 第65-66页 |
| 5.4 讨论 | 第66-67页 |
| 第六章 OsWRKY7 CRISPR/Cas9材料的获取与初步分析 | 第67-76页 |
| 6.1 实验材料与试剂 | 第67页 |
| 6.1.1 载体与菌株 | 第67页 |
| 6.1.2 试剂 | 第67页 |
| 6.2 实验方法: | 第67-71页 |
| 6.2.1 OsWRKY7靶点设计 | 第67-68页 |
| 6.2.2 Os WRKY7-Cas9载体构建 | 第68-70页 |
| 6.2.3 Os WRKY7-Cas9敲除材料的获取及突变位点的分析 | 第70-71页 |
| 6.2.4 接菌实验 | 第71页 |
| 6.3 实验结果与分析 | 第71-74页 |
| 6.3.1 突变模式分析 | 第71-73页 |
| 6.3.2 OsRKY7-CRISPR/Cas9敲除材料的抗病性分析 | 第73-74页 |
| 6.4 讨论 | 第74-76页 |
| 第七章 结论 | 第76-78页 |
| 7.1 主要结论 | 第76-77页 |
| 7.2 展望 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 附录 | 第84-87页 |
| 攻读硕士期间取得的研究成果 | 第87-88页 |
| 致谢 | 第88-90页 |
