| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1. 引言和文献综述 | 第9-22页 |
| 1.1 基因编辑技术在斑马鱼中的应用 | 第9-14页 |
| 1.1.1 斑马鱼中常见的基因编辑技术 | 第9页 |
| 1.1.2 诱变技术 | 第9-10页 |
| 1.1.3 Tol2转座子、Morpholino干扰技术 | 第10-11页 |
| 1.1.4 ZFNs、TALENs简介 | 第11-14页 |
| 1.2 CRISPR/Cas9基因编辑技术 | 第14-17页 |
| 1.2.1 CRISPR/Cas9简介 | 第14-16页 |
| 1.2.2 CRISPR/Cas9的优势 | 第16页 |
| 1.2.3 CRISPR/Cas9存在的问题 | 第16-17页 |
| 1.3 斑马鱼作为模式动物的优势 | 第17页 |
| 1.4 asb5a基因的介绍 | 第17-20页 |
| 1.5 本文研究的意义 | 第20-22页 |
| 2. 材料和方法 | 第22-35页 |
| 2.1 材料 | 第22-26页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.2 主要实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.3 主要所需溶液配方 | 第24页 |
| 2.1.4 斑马鱼品系 | 第24-25页 |
| 2.1.5 主要质粒和菌株 | 第25页 |
| 2.1.6 生物信息学分析主要数据库 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-35页 |
| 2.2.1 asb5a基因打靶位点的选择和确认 | 第26-27页 |
| 2.2.2 PCR引物的设计 | 第27-28页 |
| 2.2.3 gRNA表达载体的构建与合成 | 第28-32页 |
| 2.2.4 F0代突变鱼的制备 | 第32-33页 |
| 2.2.5 F0代突变体的筛选 | 第33-35页 |
| 3. 结果 | 第35-44页 |
| 3.1 gRNA靶位点的确定及打靶载体的构建 | 第35-38页 |
| 3.1.1 针对斑马鱼asb5a基因的打靶位点分析 | 第35-37页 |
| 3.1.2 sgRNA的制备 | 第37-38页 |
| 3.2 asb5a-F0代的鉴定分析 | 第38-44页 |
| 3.2.1 注射后胚胎有效性分析 | 第38-39页 |
| 3.2.2 F0代成鱼鉴定分析 | 第39-44页 |
| 4. 结论 | 第44-45页 |
| 5. 分析与讨论 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 附录一 | 第52-53页 |
| 附录二 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |