| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 绪论 | 第10-17页 |
| 一 真菌的遗传转化研究 | 第10-13页 |
| 1 真菌遗传转化方法 | 第10-12页 |
| 2 真菌遗传转化的选择标记 | 第12-13页 |
| 二 灰盖鬼伞的遗传转化体系研究现状 | 第13-15页 |
| 1 灰盖鬼伞的遗传背景研究概况 | 第13-14页 |
| 2 灰盖鬼伞的遗传转化系统研究 | 第14-15页 |
| 三 本论文的研究目的和主要研究内容 | 第15-17页 |
| 第2章 灰盖鬼伞粉孢子诱导及原生质体制备 | 第17-28页 |
| 第一节 灰盖鬼伞粉孢子诱导产生条件优化 | 第17-23页 |
| 1 材料方法 | 第17-20页 |
| 1.1 实验材料 | 第17页 |
| 1.2 培养基及试剂 | 第17页 |
| 1.3 实验仪器 | 第17-18页 |
| 1.4 灰盖鬼伞粉孢子的诱导产生 | 第18-19页 |
| 1.5 诱导灰盖鬼伞粉孢子产生的光照培养时间优化 | 第19-20页 |
| 1.6 诱导灰盖鬼伞粉孢子产生的黑暗培养时间优化 | 第20页 |
| 2 实验结果 | 第20-22页 |
| 2.1 灰盖鬼伞粉孢子的诱导产生条件 | 第20-21页 |
| 2.2 诱导灰盖鬼伞粉孢子产生的黑暗和光照培养时间优化 | 第21-22页 |
| 3 讨论 | 第22-23页 |
| 第二节 灰盖鬼伞原生质体的制备 | 第23-27页 |
| 1 材料方法 | 第23-24页 |
| 1.1 实验材料 | 第23页 |
| 1.2 培养基及试剂 | 第23页 |
| 1.3 实验仪器 | 第23页 |
| 1.4 灰盖鬼伞粉孢子制备原生质体 | 第23-24页 |
| 1.5 灰盖鬼伞菌丝制备原生质体 | 第24页 |
| 2 结果 | 第24-26页 |
| 2.1 灰盖鬼伞的粉孢子制备原生质体 | 第24-25页 |
| 2.2 灰盖鬼伞的菌丝制备原生质体 | 第25-26页 |
| 3 讨论 | 第26-27页 |
| 本章小结 | 第27-28页 |
| 第3章 以潮霉素为抗性筛选标记的灰盖鬼伞遗传转化研究 | 第28-51页 |
| 第一节 潮霉素抗性筛选标记质粒的构建 | 第28-40页 |
| 1 材料方法 | 第28-35页 |
| 1.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 1.2 培养基及试剂 | 第29-30页 |
| 1.3 实验器材 | 第30页 |
| 1.4 提取灰盖鬼伞ATCC-56838的基因组DNA | 第30-31页 |
| 1.5 构建克隆载体pTPHT-6 | 第31-33页 |
| 1.6 构建克隆载体pCRGxHT-1 | 第33-34页 |
| 1.7 以烟曲霉转化系统验证潮霉素筛选标记质粒 | 第34-35页 |
| 2 实验结果 | 第35-38页 |
| 2.1 克隆载体pTPHT-6的构建 | 第35-36页 |
| 2.2 克隆载体pCRGxHT-1的构建 | 第36-38页 |
| 2.3 以烟曲霉转化系统对潮霉素筛选标记质粒的验证 | 第38页 |
| 3 讨论 | 第38-40页 |
| 第二节 以潮霉素为抗性筛选标记的灰盖鬼伞遗传转化研究 | 第40-50页 |
| 1 材料方法 | 第40-43页 |
| 1.1 实验材料 | 第40页 |
| 1.2 培养基及试剂 | 第40页 |
| 1.3 实验器材 | 第40-41页 |
| 1.4 灰盖鬼伞粉孢子的潮霉素耐受性检测 | 第41页 |
| 1.5 PEG-CaCl_2介导转化灰盖鬼伞AmutBmut | 第41页 |
| 1.6 农杆菌介导灰盖鬼伞AmutBmut的转化 | 第41-42页 |
| 1.7 电击转化介导灰盖鬼伞AmutBmut的转化 | 第42-43页 |
| 2 结果 | 第43-48页 |
| 2.1 灰盖鬼伞粉孢子的潮霉素耐受性检测 | 第43-44页 |
| 2.2 PEG-CaCl_2介导灰盖鬼伞AmutBmut的转化结果 | 第44-45页 |
| 2.3 农杆菌介导灰盖鬼伞AmutBmut的转化 | 第45-47页 |
| 2.4 电击介导灰盖鬼伞AmutBmut的转化 | 第47-48页 |
| 3 讨论 | 第48-50页 |
| 本章小结 | 第50-51页 |
| 第4章 以PABA为营养缺陷型筛选遗传标记的灰盖鬼伞遗传转化研究 | 第51-70页 |
| 第一节 以PABA为营养缺陷型筛选标记的灰盖鬼伞遗传转化 | 第51-60页 |
| 1 材料方法 | 第51-55页 |
| 1.1 实验材料 | 第51页 |
| 1.2 培养基及试剂 | 第51-52页 |
| 1.3 实验仪器 | 第52页 |
| 1.4 营养缺陷型菌株在基本培养基上生长情况检测 | 第52页 |
| 1.5 构建PABA营养缺陷型标签克隆载体pEASY-zero-pab1 | 第52-53页 |
| 1.6 以PABA为营养缺陷型筛选标记的灰盖鬼伞遗传转化 | 第53-54页 |
| 1.7 阳性转化子的PCR验证 | 第54-55页 |
| 1.8 阳性转化子的点圈表型验证实验 | 第55页 |
| 2 结果 | 第55-58页 |
| 2.1 营养缺陷型菌株在基本培养基上生长情况 | 第55-56页 |
| 2.2 PABA营养缺陷型标签克隆载体pEASY-zero-pab1的构建 | 第56-57页 |
| 2.3 以PABA营养缺陷型筛选标记的灰盖鬼伞遗传转化结果及转化子验证 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-60页 |
| 第二节 pEASY-zero-pab1和绿色荧光蛋白标记质粒pCCGFP-Xpro-1共转化灰盖鬼伞研究 | 第60-69页 |
| 1 材料方法 | 第60-63页 |
| 1.1 实验材料 | 第60页 |
| 1.2 培养基及试剂 | 第60页 |
| 1.3 实验仪器 | 第60-61页 |
| 1.4 绿色荧光蛋白标记pCCGFP-Xpro-1质粒的构建 | 第61页 |
| 1.5 pEASY-zero-pab1和绿色荧光蛋白标记质粒pCCGFP-Xpro-1共转化灰盖鬼伞研究 | 第61-63页 |
| 1.6 转化子的基因验证和荧光检测 | 第63页 |
| 1.7 共转化阳性克隆的荧光检测 | 第63页 |
| 2 结果 | 第63-67页 |
| 2.1 绿色荧光蛋白标记pCCGFP-Xpro-1质粒的构建 | 第63-66页 |
| 2.2 转化子的基因验证和荧光检测结果 | 第66-67页 |
| 3 讨论 | 第67-69页 |
| 本章小结 | 第69-70页 |
| 第5章 总结 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
