| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-15页 |
| 1.1 选题的背景及意义 | 第11页 |
| 1.2 红景天苷的生物合成途径 | 第11-12页 |
| 1.3 糖基转移酶 | 第12-13页 |
| 1.4 大肠杆菌表达系统的研究进展 | 第13-15页 |
| 第二章 小叶女贞叶片转录组学研究 | 第15-28页 |
| 2.1 引言 | 第15页 |
| 2.2 材料与方法 | 第15-19页 |
| 2.2.1 材料与试剂 | 第15-16页 |
| 2.2.2 仪器 | 第16页 |
| 2.2.3 RNA提取 | 第16-18页 |
| 2.2.4 Total RNA样品检测 | 第18页 |
| 2.2.5 文库构建 | 第18页 |
| 2.2.6 序列的拼接与组装 | 第18-19页 |
| 2.2.7 功能注释,GO分类和代谢路径分析 | 第19页 |
| 2.2.8 SSR位点搜索和分析 | 第19页 |
| 2.3 结果与分析 | 第19-26页 |
| 2.3.1 测序及序列拼接组装 | 第19-21页 |
| 2.3.2 序列比对和功能注释 | 第21-22页 |
| 2.3.3 功能分类和代谢途径分析 | 第22-25页 |
| 2.3.4 SSR分析 | 第25-26页 |
| 2.4 讨论 | 第26-27页 |
| 2.5 总结 | 第27-28页 |
| 第三章 小叶女贞糖基转移酶xynzUGT的克隆与分析 | 第28-47页 |
| 3.1 引言 | 第28页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第28-29页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第29页 |
| 3.3 实验方法 | 第29-38页 |
| 3.3.1 小叶女贞的叶片处理 | 第29页 |
| 3.3.2 小叶女贞叶片总RNA提取及引物 | 第29-30页 |
| 3.3.3 小叶女贞叶片3'RACE产物的合成 | 第30-34页 |
| 3.3.3.1 3'RACE逆转录 | 第30-31页 |
| 3.3.3.2 3'RACE PCR | 第31-32页 |
| 3.3.3.3 3'RACE PCR产物胶回收与克隆载体连接 | 第32-33页 |
| 3.3.3.4 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第33-34页 |
| 3.3.3.5 克隆载体转化到大肠杆菌 | 第34页 |
| 3.3.4 小叶女贞叶片5'RACE产物的合成 | 第34-36页 |
| 3.3.4.1 5'RACE逆转录 | 第34页 |
| 3.3.4.2 5'RACE PCR | 第34-36页 |
| 3.3.5 xynzUGT开放阅读框克隆 | 第36-38页 |
| 3.3.5.1 xynzUGT基因表达引物设计 | 第36页 |
| 3.3.5.2 xynzUGT开放阅读框克隆与回收 | 第36-37页 |
| 3.3.5.3 xynzUGT基因克隆载体的构建及转化 | 第37页 |
| 3.3.5.4 克隆载体转化结果鉴定 | 第37-38页 |
| 3.3.5.5 xynzUGT全基因生物信息学分析 | 第38页 |
| 3.4 结果与分析 | 第38-45页 |
| 3.4.1 xynzUGT基因的克隆 | 第38-40页 |
| 3.4.2 xynzUGT的生物信息学分析 | 第40-45页 |
| 3.5 讨论 | 第45-46页 |
| 3.6 本章小结 | 第46-47页 |
| 第四章 xynzUGT原核表达与可溶性研究 | 第47-61页 |
| 4.1 引言 | 第47页 |
| 4.2 实验仪器与试剂 | 第47-51页 |
| 4.2.1 仪器 | 第47页 |
| 4.2.2 试剂 | 第47页 |
| 4.2.3 试剂配制 | 第47-51页 |
| 4.3 实验方法 | 第51-56页 |
| 4.3.1 菌种的扩大培养和质粒提取 | 第51-52页 |
| 4.3.2 xynzUGT原核表达菌株构建 | 第52页 |
| 4.3.3 xynzUGT工程菌的诱导表达 | 第52-53页 |
| 4.3.4 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第53-54页 |
| 4.3.5 xynzUGT蛋白表达条件优化 | 第54-55页 |
| 4.3.6 不同分子伴侣对蛋白可溶性表达影响 | 第55-56页 |
| 4.4 结果与分析 | 第56-60页 |
| 4.4.1 重组载体PET-28a-UGT的筛选及鉴定 | 第56-57页 |
| 4.4.2 重组质粒pET-28a-UGT的测序 | 第57页 |
| 4.4.3 SDS-PAGE蛋白电泳检测工程菌中目的蛋白的表达 | 第57-59页 |
| 4.4.4 分子伴侣促溶分析 | 第59-60页 |
| 4.5 小结 | 第60-61页 |
| 第五章 结论与展望 | 第61-63页 |
| 5.1 结论 | 第61-62页 |
| 5.2 展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 附录Ⅰ | 第69-79页 |
| 参考文献 | 第76-79页 |
