| 摘要 | 第7-8页 |
| abstract | 第8页 |
| 英文缩略表 | 第12-13页 |
| 第一章 引言 | 第13-21页 |
| 1.1 CCoV病原学与流行病学研究进展 | 第13-19页 |
| 1.1.1 概述 | 第13页 |
| 1.1.2 分类地位 | 第13页 |
| 1.1.3 形态及结构 | 第13-14页 |
| 1.1.4 基因组结构 | 第14-15页 |
| 1.1.5 编码的蛋白及功能 | 第15-16页 |
| 1.1.6 流行特点 | 第16-17页 |
| 1.1.7 临床症状 | 第17页 |
| 1.1.8 病理变化 | 第17页 |
| 1.1.9 发病机制 | 第17-18页 |
| 1.1.10 诊断 | 第18-19页 |
| 1.1.11 免疫与预防 | 第19页 |
| 1.1.12 治疗 | 第19页 |
| 1.2 分离鉴定研究进展 | 第19-20页 |
| 1.3 研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 犬冠状病毒的分离与鉴定 | 第21-36页 |
| 2.1 材料 | 第21页 |
| 2.1.1 毒株和细胞 | 第21页 |
| 2.1.2 主要试剂和仪器 | 第21页 |
| 2.2 方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 粪样的采集及处理 | 第21页 |
| 2.2.2 RT-PCR鉴定 | 第21-23页 |
| 2.2.3 CCoV的分离 | 第23-24页 |
| 2.2.4 病毒的形态学鉴定 | 第24页 |
| 2.2.5 基因型鉴定 | 第24页 |
| 2.2.6 间接免疫荧光试验 | 第24-25页 |
| 2.2.7 病毒TCID50的测定 | 第25页 |
| 2.2.8 一步生长曲线的测定 | 第25页 |
| 2.2.9 序列测定 | 第25-27页 |
| 2.3 结果 | 第27-34页 |
| 2.3.1 RT-PCR法的优化及灵敏性检测 | 第27-29页 |
| 2.3.2 样品检测结果 | 第29页 |
| 2.3.3 病毒分离培养结果 | 第29-30页 |
| 2.3.4 电镜观察结果 | 第30-31页 |
| 2.3.5 基因型鉴定结果 | 第31页 |
| 2.3.6 间接免疫荧光试验结果 | 第31-32页 |
| 2.3.7 病毒毒力测定结果 | 第32页 |
| 2.3.8 一步生长曲线的测定 | 第32页 |
| 2.3.9 系统发育分析 | 第32-34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 SYBRGreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 | 第36-46页 |
| 3.1 材料 | 第36页 |
| 3.1.1 毒株和细胞 | 第36页 |
| 3.1.2 主要试剂和仪器 | 第36页 |
| 3.2 方法 | 第36-39页 |
| 3.2.1 重组质粒标准品的制备 | 第36-38页 |
| 3.2.2 SYBRGreenI荧光定量RT-PCR检测方法的建立 | 第38-39页 |
| 3.2.3 临床病料的检测 | 第39页 |
| 3.3 结果 | 第39-44页 |
| 3.3.1 目的基因的RT-PCR扩增结果 | 第39页 |
| 3.3.2 重组质粒鉴定结果 | 第39-40页 |
| 3.3.3 实时荧光定量RT-PCR方法的建立 | 第40-43页 |
| 3.3.4 临床样品的检测 | 第43-44页 |
| 3.4 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 鉴别CCoV-Ⅰ和CCoV-Ⅱ双重纳米RT-PCR方法的建立 | 第46-54页 |
| 4.1 材料 | 第46页 |
| 4.1.1 毒株和细胞 | 第46页 |
| 4.1.2 主要试剂和仪器 | 第46页 |
| 4.2 方法 | 第46-49页 |
| 4.2.1 重组质粒的制备 | 第46-48页 |
| 4.2.2 CCoV-Ⅰ和CCoV-Ⅱ双重nanoRT-PCR检测方法的建立 | 第48页 |
| 4.2.3 临床样本检测 | 第48-49页 |
| 4.3 结果 | 第49-52页 |
| 4.3.1 重组质粒的鉴定 | 第49页 |
| 4.3.2 CCoV-Ⅰ和CCoV-Ⅱ双重nanoRT-PCR检测方法的建立 | 第49-51页 |
| 4.3.3 临床样品的检测 | 第51-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-54页 |
| 第五章 全文结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-61页 |
| 附录 | 第61-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简历 | 第66页 |
