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黄翅大白蚁肠道微生物研究

摘要第7-9页
Abstract第9-10页
第一章 绪论第11-25页
    1.1 木质纤维素及其降解酶第11-13页
        1.1.1 木质纤维素第11-12页
        1.1.2 木质纤维素降解酶第12-13页
    1.2 白蚁概述第13-16页
        1.2.1 白蚁分类第13页
        1.2.2 白蚁的消化道及其食性第13-15页
        1.2.3 高等培菌白蚁第15-16页
    1.3 低等白蚁及其肠道共生体系研究进展第16-18页
        1.3.1 低等白蚁肠道共生体系第16-17页
        1.3.2 低等白蚁肠道原生动物第17-18页
    1.4 高等白蚁及其微生物共生体系研究进展第18-22页
        1.4.1 木食性高等白蚁及微生物共生体系研究进展第19-20页
        1.4.2 土食性高等白蚁及微生物共生体系研究进展第20页
        1.4.3 培菌高等白蚁及微生物共生体系研究进展第20-22页
    1.5 本文立题依据和研究内容第22-25页
        1.5.1 立题依据第22页
        1.5.2 基本思路第22-25页
第二章 黄翅大白蚁肠道细菌多样性分析第25-43页
    2.1 引言第25页
    2.2 实验材料与方法步骤第25-28页
        2.2.1 实验材料第26页
        2.2.2 实验试剂与仪器第26页
        2.2.3 黄翅大白蚁中后肠样品材料的获得第26页
        2.2.4 肠道宏基因组提取第26页
        2.2.5 白蚁中后肠细菌16S rRNA V1-V3区的扩增第26-27页
        2.2.6 PCR片段的定量第27页
        2.2.7 焦磷酸测序第27页
        2.2.8 测序信息的优化第27页
        2.2.9 焦磷酸测序数据的分析第27-28页
        2.2.10 基于统计学数据的多样性分析第28页
    2.3 实验结果第28-40页
        2.3.1 白蚁采集与解剖第28-29页
        2.3.2 PCR产物的检测第29-30页
        2.3.3 DNA浓度的检测第30-31页
        2.3.4 优化序列数据统计第31-32页
        2.3.5 微生物OTU稀释性曲线分析第32-34页
        2.3.6 微生物多样性指数统计第34-35页
        2.3.7 中肠与后肠微生物类群在门水平的的比较第35-36页
        2.3.8 中肠与后肠微生物类群在科水平的比较第36-37页
        2.3.9 中后肠细菌分类学树状图分析第37-40页
    2.4 小结与讨论第40-43页
第三章 黄翅大白蚁后肠降解滤纸微生物群落的分析第43-53页
    3.1 引言第43-44页
    3.2 实验材料、试剂与仪器第44页
        3.2.1 菌株与质粒第44页
        3.2.2 培养基第44页
        3.2.3 实验主要仪器第44页
    3.3 实验方法与步骤第44-46页
        3.3.1 白蚁解剖及肠道微生物样品提取第44页
        3.3.2 微生物的培养第44-45页
        3.3.3 纤维素降解酶类的酶谱分析第45页
        3.3.4 总基因组提取第45页
        3.3.5 变性梯度凝胶电泳分析群落结构第45-46页
        3.3.6 滤纸降解细菌和真菌的菌种鉴定第46页
    3.4 实验结果第46-51页
        3.4.1 黄翅大白蚁后肠微生物群落对滤纸的降解作用第46-47页
        3.4.2 滤纸降解微生物群落的酶谱分析第47-48页
        3.4.3 滤纸降解群落中细菌和真菌的存在性验证第48-49页
        3.4.4 变性梯度凝胶电泳PCR的电泳验证第49页
        3.4.5 滤纸降解细菌及真菌群DGGE第49-50页
        3.4.6 DGGE所示细菌和真菌条带的菌种鉴定第50-51页
    3.5 小结与讨论第51-53页
第四章 黄翅大白蚁肠道木聚糖降解菌的分离培养第53-67页
    4.1 引言第53-54页
    4.2 实验材料、试剂与仪器第54页
        4.2.1 实验材料第54页
        4.2.2 实验试剂与仪器第54页
    4.3 实验方法与步骤第54-57页
        4.3.1 培养基的选择第54页
        4.3.2 白蚁的解剖及肠道微生物样品提取第54页
        4.3.3 微生物的培养及木聚糖降解微生物的筛选纯化第54页
        4.3.4 微生物基因组的提取第54页
        4.3.5 木聚糖降解微生物的鉴定第54-55页
        4.3.6 刚果红染色法检测微生物木聚糖酶活性第55页
        4.3.7 DNS方法测定木聚糖酶酶活第55页
        4.3.8 蛋白质标准曲线的绘制第55-56页
        4.3.9 葡萄糖标准曲线的绘制第56-57页
        4.3.10 微生物的木聚糖酶谱分析第57页
    4.4 实验结果第57-65页
        4.4.1 黄翅大白蚁木聚糖降解微生物的筛选及单克隆获得第57-58页
        4.4.2 蛋白质标准曲线的绘制第58-60页
        4.4.3 DNS法测还原糖标准曲线第60页
        4.4.4 微生物的种类鉴定第60-61页
        4.4.5 木聚糖酶活性分析第61-64页
        4.4.6 酶活性随生长曲线的变化第64页
        4.4.7 木聚糖降解菌的酶谱性质分析第64-65页
    4.5 小结与讨论第65-67页
第五章 总结与展望第67-69页
附录第69-85页
    附录一 CTAB法提取白蚁肠道宏基因组第69-70页
    附录二 DNA扩增片段的浓度定量第70-72页
    附录三 本文所使用的主要仪器第72-73页
    附录四 所涉及的主要培养基第73-74页
    附录五 酶活性测定所涉及溶液的配制第74-75页
    附录六 变性梯度凝胶电泳试剂配制第75-79页
    附录八 克隆PCR筛选目的转化子第79-80页
    附录九 降解滤纸微生物群落16S rDNA及18 SrDNA序列第80-83页
    附录十 Mb1-6 16S rDNA序列(1537 bp)第83-85页
参考文献第85-93页
致谢第93-95页
攻读学位期间参与发表的论文第95-96页
学位论文评阅及答辩情况表第96页

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