| 符号说明 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-22页 |
| 1.1 植物抗旱机制的研究进展 | 第13-17页 |
| 1.1.1 形态和解剖结构对干旱胁迫的适应机制 | 第14-15页 |
| 1.1.2 渗透调节机制 | 第15页 |
| 1.1.3 激素调节机制 | 第15-16页 |
| 1.1.4 抗氧化防护系统 | 第16页 |
| 1.1.5 干旱胁迫诱导蛋白 | 第16-17页 |
| 1.2 植物 DREB 类转录因子的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.2.1 DREB 的结构 | 第17页 |
| 1.2.2 DREB 的分类 | 第17-18页 |
| 1.2.3 DREB 在逆境胁迫中的作用 | 第18-19页 |
| 1.2.4 花生 DREB 的研究进展 | 第19页 |
| 1.3 植物 NAC 类转录因子的研究进展 | 第19-21页 |
| 1.3.1 NAC 的结构 | 第19页 |
| 1.3.2 NAC 的分类 | 第19-20页 |
| 1.3.3 NAC 在逆境胁迫中的作用 | 第20页 |
| 1.3.4 花生 NAC 的研究进展 | 第20-21页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-36页 |
| 2.1 花生 DREB1 和 NAC4 基因的克隆试验 | 第22-28页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第22页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.3 试验方法 | 第23-28页 |
| 2.1.3.1 引物设计 | 第23页 |
| 2.1.3.2 花生叶片总 RNA 的提取与检测 | 第23-24页 |
| 2.1.3.3 RNA 的反转录 | 第24-25页 |
| 2.1.3.4 花生 DREB1 和 NAC4 基因的 cDNA 序列的 PCR 扩增 | 第25-26页 |
| 2.1.3.5 花生叶片基因组 DNA 的提取 | 第26页 |
| 2.1.3.6 花生 DREB1 和 NAC4 基因 DNA 序列的 PCR 扩增 | 第26-27页 |
| 2.1.3.7 PCR 产物的胶回收 | 第27页 |
| 2.1.3.8 目的片段与 pEASY-T1 载体连接并转化大肠杆菌 | 第27-28页 |
| 2.1.3.9 阳性重组子的鉴定和测序 | 第28页 |
| 2.1.3.10 序列生物信息学分析 | 第28页 |
| 2.2 花生 DREB1 的表达分析 | 第28-31页 |
| 2.2.1 试验材料 | 第28-29页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第29页 |
| 2.2.3 试验方法 | 第29-31页 |
| 2.2.3.1 材料处理和取样方法 | 第29页 |
| 2.2.3.2 不同品种不同处理时间总 RNA 的提取与反转录 | 第29页 |
| 2.2.3.3 实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)引物设计 | 第29-30页 |
| 2.2.3.4 qRT-PCR 反应及数据处理 | 第30页 |
| 2.2.3.5 脯氨酸含量测定 | 第30-31页 |
| 2.3 DREB1 表达载体的构建及转化试验 | 第31-36页 |
| 2.3.1 菌种和质粒 | 第31页 |
| 2.3.2 酶和试剂 | 第31页 |
| 2.3.3 试验方法 | 第31-36页 |
| 2.3.3.1 质粒 DNA 的提取 | 第31-32页 |
| 2.3.3.2 双酶切 pEAZY-T1 与 pGBVE质粒 | 第32页 |
| 2.3.3.3 连接目的片段与质粒大片段 | 第32-33页 |
| 2.3.3.4 重组质粒转化大肠杆菌感受态细胞 | 第33页 |
| 2.3.3.5 重组质粒的筛选与鉴定 | 第33页 |
| 2.3.3.6 农杆菌 LBA4404 感受态细胞的制备 | 第33页 |
| 2.3.3.7 重组质粒转入农杆菌感受态细胞并筛选鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.3.8 农杆菌介导的花生遗传转化 | 第34页 |
| 2.3.3.9 PPT 抗性苗 PCR 检测 | 第34-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-51页 |
| 3.1 花生 DREB1 基因的克隆及等位变异分析 | 第36-39页 |
| 3.1.1 DREB1 基因的克隆 | 第36页 |
| 3.1.2 花生 DREB1 核苷酸序列差异分析 | 第36-38页 |
| 3.1.3 花生 DREB1 编码的氨基酸序列分析 | 第38-39页 |
| 3.2 AhDREB1 响应渗透胁迫的表达分析 | 第39-43页 |
| 3.2.1 花生品种苗期抗旱系数比较 | 第39-40页 |
| 3.2.2 PEG 胁迫下 AhDREB1 的相对表达量分析 | 第40页 |
| 3.2.3 PEG 胁迫下脯氨酸含量分析 | 第40-41页 |
| 3.2.4 AhDREB1 基因植物表达载体的构建及遗传转化 | 第41-42页 |
| 3.2.5 转基因植株的 PCR 鉴定 | 第42-43页 |
| 3.3 花生 NAC4 基因的克隆 | 第43-45页 |
| 3.3.1 AhNAC4 基因生物信息学分析 | 第43-44页 |
| 3.3.2 AhNAC4 响应 PEG 渗透胁迫的表达分析 | 第44页 |
| 3.3.3 AhNAC4 基因的克隆 | 第44-45页 |
| 3.3.4 AhNAC4 分子特征分析 | 第45页 |
| 3.4 花生 NAC4 基因等位变异分析 | 第45-51页 |
| 3.4.1 AhNAC4 核苷酸序列差异分析 | 第45-46页 |
| 3.4.2 AhNAC4 氨基酸序列差异分析 | 第46-47页 |
| 3.4.3 不同抗旱性品种 NAC4 基因组成分析 | 第47页 |
| 3.4.4 花生野生种和栽培种 NAC4 的等位变异分析 | 第47-50页 |
| 3.4.5 花生野生种和栽培种 NAC4 编码蛋白的氨基酸序列分析 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-54页 |
| 4.1 花生 DREB1 的核苷酸差异分析 | 第51页 |
| 4.2 渗透胁迫下 AhDREB1 的相对表达量与脯氨酸含量的相关性分析 | 第51-52页 |
| 4.3 花生 NAC4 的序列分析 | 第52页 |
| 4.4 不同抗旱品种 NAC4 基因组成及作用分析 | 第52-53页 |
| 4.5 花生野生种的研究意义 | 第53-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 5.1 花生 DREB1 基因的等位变异和功能分析 | 第54页 |
| 5.2 花生 NAC4 基因的分子特征和等位变异分析 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 附录 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第66页 |
