| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| CHAPTER 1 Introduction | 第9-19页 |
| 1.1 Cyclodextrin glucanotransferase (CGTase) | 第9-11页 |
| 1.2 Strategies for enhancing extracellular recombinant CGTase secretion in E. coli | 第11-13页 |
| 1.3 Cyclodextrins (CDs) | 第13-14页 |
| 1.4 Starch | 第14-15页 |
| 1.5 Industrial applications of cyclodextrins | 第15页 |
| 1.6 Enzymatic production of cyclodextrins | 第15-17页 |
| 1.7 Objective of the study | 第17-18页 |
| 1.8 The main scopes of this study | 第18-19页 |
| Chapter 2 Materials and Methods | 第19-26页 |
| 2.1 Chemicals | 第19页 |
| 2.2 Culture media | 第19页 |
| 2.3 Microorganism and plasmid | 第19-20页 |
| 2.4 Transformation into E. coli | 第20页 |
| 2.5 LB-agar cultivation | 第20页 |
| 2.6 TB-medium cultivation | 第20页 |
| 2.7 Expression of α-CGTase | 第20-21页 |
| 2.8 Fermentation media | 第21-22页 |
| 2.8.1 Cultivation conditions | 第21-22页 |
| 2.9 Cell fractionation | 第22页 |
| 2.10 Enzyme activity | 第22-24页 |
| 2.10.1 Assay of α-CGTase (Cyclization reaction) | 第22-23页 |
| 2.10.2 Assay of β-CGTase | 第23-24页 |
| 2.10.3 Assay of γ-CGTase | 第24页 |
| 2.11 Coupling reaction with and/or without organic solvent | 第24页 |
| 2.12 SDS-PAGE Analysis | 第24-25页 |
| 2.13 Starch liquefaction | 第25页 |
| 2.14 Bioconversion | 第25页 |
| 2.15 Steam distillation | 第25页 |
| 2.16 Α, β and γ-CDs analysis | 第25-26页 |
| CHAPTER 3 Result and Discussion | 第26-52页 |
| 3.1 Construction of plasmid with secretive signal peptide and transformation into E. coli for protein production | 第26-27页 |
| 3.2 Fermentation Optimization in shaking flasks | 第27-37页 |
| 3.2.1 Effect of cultivation temperature | 第28页 |
| 3.2.2 Effect of carbon sources | 第28-29页 |
| 3.2.3 Effect of nitrogen sources | 第29-30页 |
| 3.2.4 Effect of metallic ions | 第30-31页 |
| 3.2.5 Effect of medium additives | 第31-35页 |
| 3.2.6 Orthogonal analysis | 第35-37页 |
| 3.4 Recombinant CGTase characterization | 第37-44页 |
| 3.4.1 Effect of temperature and pH | 第37-38页 |
| 3.4.2 Stability of the recombinant CGTase at storage | 第38页 |
| 3.4.3 Bioconversion | 第38-44页 |
| 3.4.3.1 Effect of substrates | 第38-40页 |
| 3.4.3.2 Optimum CGTase reaction conditions in the absence/presence of organic solvents | 第40-41页 |
| 3.4.3.3 Effect of organic solvents on the biochemical activity of recombinant CGTase | 第41-44页 |
| 3.5 Fermentation optimization in bioreactor | 第44-50页 |
| 3.5.1 Batch culture | 第45-46页 |
| 3.5.2 Fed-batch culture fermentation | 第46-47页 |
| 3.5.3 Effect of induction on cell growth and CGTase Production | 第47-48页 |
| 3.5.4 Effect of chemical additives, Tween-80 | 第48-49页 |
| 3.5.5 Effect of induction temperature on cell growth and CGTase production from 3Lfermentor | 第49-50页 |
| 3.6 Conclusions and expectations | 第50-52页 |
| Acknowledgement | 第52-53页 |
| References | 第53-60页 |
| Publications | 第60-61页 |
| List of abbreviations and symbols | 第61-62页 |
