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mChIL-18基因与IBDV VP2基因或AIV HA1基因在pFastBacTM Dual中的共表达及其免疫原性研究

中文摘要第1-14页
英文摘要第14-18页
1 前言第18-38页
   ·白细胞介素18 的研究进展第18-23页
     ·IL-18 的发现第18页
     ·IL-18 的分子结构第18-19页
     ·IL-18 的分布及产生第19-20页
     ·IL-18 的生物学功能第20-23页
   ·鸡IL-18 的研究进展第23-24页
     ·鸡IL-18 的发现第23-24页
     ·鸡IL-18 的研究第24页
   ·传染性法氏囊病第24-27页
     ·传染性法氏囊病概述第24-25页
     ·IBD 的结构和分子生物学特性第25-26页
     ·IBD 的免疫第26-27页
     ·亚单位疫苗的研制第27页
   ·禽流感研究进展第27-33页
     ·禽流感概述第27-28页
     ·AI 在世界范围内的流行第28-29页
     ·AI 对其它动物甚至人类的影响第29-30页
     ·AIV 的分子病毒学第30-31页
     ·HA 的生物学功能第31-32页
     ·AI 的免疫第32页
     ·亚单位疫苗的研制第32-33页
   ·杆状病毒表达系统研究进展第33-37页
     ·杆状病毒的细胞病理效应第34页
     ·杆状病毒表达载体的分类第34页
     ·杆状病毒表达载体的构建第34-35页
     ·重组杆状病毒的构建和筛选第35-36页
     ·杆状病毒表达载体系统的优越性第36-37页
     ·His 标签的引入第37页
   ·本研究的目的及意义第37-38页
2 材料与方法第38-72页
   ·材料第38-45页
     ·质粒、细胞、受体菌、菌株及实验动物第38-40页
     ·所用试剂及耗材第40-41页
     ·主要培养基及试剂的配制方法第41-44页
     ·主要仪器及设备第44-45页
   ·方法第45-72页
     ·引物设计及合成第46-47页
     ·m ChIL-18 基因重组转移载体的构建第47-52页
     ·VP2 基因重组转移载体的构建第52-53页
     ·HA1 基因重组转移载体的构建第53-54页
     ·m ChIL-18 和VP2 基因共表达重组转移载体的构建第54-56页
     ·m ChIL-18 和HA1 基因共表达重组转移载体的构建第56-57页
     ·重组质粒的转座(即重组Bacmid 的构建)第57-59页
     ·重组Bacmid DNA 的提取及鉴定第59-60页
     ·重组Bacmid 转染sf9 昆虫细胞及收获重组杆状病毒第60-63页
     ·m ChIL-18、VP2 及HA1 在sf9 昆虫细胞中的单独或同时表达第63-64页
     ·sf9 昆虫细胞表达蛋白的鉴定第64-65页
     ·重组mChIL-18 蛋白促进鸡脾淋巴细胞增殖试验(MTT 法)第65-67页
     ·重组m ChIL-18 蛋白蛋白诱导鸡脾淋巴细胞产生IFN-γ第67页
     ·重组mChIL-18 蛋白诱导的IFN-γ对VSV 的抑制活性第67页
     ·蛋白的纯化第67-68页
     ·油乳剂疫苗的制备第68页
     ·动物免疫第68-69页
     ·细胞免疫检测(流氏细胞术)第69-70页
     ·抗体检测试剂盒第70-71页
     ·血凝血抑第71-72页
     ·攻毒试验第72页
3 结果与分析第72-94页
   ·重组转移载体的构建与鉴定第72-78页
     ·m ChIL-18 基因的克隆、序列测定及其分析第72-74页
     ·VP2 基因的克隆、序列测定及其分析第74-75页
     ·HA1 基因的克隆、序列测定及其分析第75-77页
     ·pF-IL18-VP2 共表达重组杆状病毒转移载体的构建第77页
     ·pF-IL18-HA1 共表达重组杆状病毒转移载体的构建第77-78页
   ·重组Bacmid 的筛选与鉴定第78-80页
   ·重组杆状病毒的DNA 鉴定第80页
   ·目的片段在sf9 昆虫细胞中的表达第80-85页
     ·重组杆状病毒的细胞病变观察第80-81页
     ·表达产物的SDS-PAGE 检测第81-83页
     ·表达产物的IFA 检测第83-85页
   ·表达产物的生物学活性检测第85-88页
     ·蛋白促进鸡脾淋巴细胞增殖试验第85-86页
     ·蛋白诱导鸡脾淋巴细胞产生IFN-γ第86页
     ·蛋白诱导的IFN-γ对VSV 的抑制作用第86-88页
   ·表达蛋白的免疫原性研究第88-94页
     ·pIL18、pVP2 与pVP2-IL18 促进细胞免疫水平检测第88-89页
     ·pIL18、pHA1 与pHA1-IL18 促进细胞免疫水平检测第89-91页
     ·pIL18、pVP2 与pVP2-IL18 促进抗体水平检测第91页
     ·pIL18、pHA1 与pHA1-IL18 促进抗体水平检测第91-93页
     ·pIL18、pHA1 与pHA1-IL18 攻毒保护试验第93-94页
4 讨论第94-99页
5 结论第99-100页
6 参考文献第100-117页
7 附录第117-118页
8 致谢第118-119页
9 攻读学位期间发表论文情况第119-120页
博士学位论文内容简介及自评第120页

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