| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-31页 |
| 1.1 沙门氏菌的危害及抗性菌株的出现 | 第15-18页 |
| 1.1.1 沙门氏菌的危害 | 第15-16页 |
| 1.1.2 抗性菌株的出现 | 第16-18页 |
| 1.2 乳酸菌的发现及应用 | 第18-23页 |
| 1.2.1 乳酸菌的概述 | 第18页 |
| 1.2.2 乳酸菌对机体的作用及机制 | 第18-23页 |
| 1.3 乳酸菌的研究现状 | 第23-29页 |
| 1.3.1 传统指标筛选乳酸菌存在弊端 | 第23-24页 |
| 1.3.2 免疫调节活性筛选乳酸菌的应用 | 第24-25页 |
| 1.3.3 工程乳酸菌的应用 | 第25-29页 |
| 1.4 研究目的与内容 | 第29-31页 |
| 1.4.1 研究目的 | 第29页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第29-31页 |
| 第二章 肉鸡细胞因子的原核表达及多克隆抗体的制备 | 第31-47页 |
| 2.1 材料 | 第31-32页 |
| 2.1.1 载体和菌种 | 第31页 |
| 2.1.2 试验动物 | 第31-32页 |
| 2.1.3 主要试剂和主要仪器 | 第32页 |
| 2.1.4 培养基及所需试剂的配制 | 第32页 |
| 2.2 方法 | 第32-38页 |
| 2.2.1 组织取样及总RNA提取 | 第32页 |
| 2.2.2 cDNA第一链合成 | 第32-33页 |
| 2.2.3 构建一个包含抗原决定簇片段序列的基因工程菌 | 第33-37页 |
| 2.2.4 肉鸡细胞因子蛋白的原核表达 | 第37-38页 |
| 2.2.5 目的蛋白的检测 | 第38页 |
| 2.2.6 目的蛋白的纯化 | 第38页 |
| 2.2.7 纯化蛋白的Western blot检测 | 第38页 |
| 2.2.8 多克隆抗体的制备 | 第38页 |
| 2.3 实验结果 | 第38-45页 |
| 2.3.1 肉鸡细胞因子基因抗原决定簇片段的克隆 | 第38-39页 |
| 2.3.2 原核表达载体的构建及酶切验证 | 第39-40页 |
| 2.3.3 重组表达质粒的测序鉴定 | 第40页 |
| 2.3.4 重组蛋白的诱导表达、纯化与鉴定 | 第40-43页 |
| 2.3.5 抗血清效价测定及血清收集 | 第43-45页 |
| 2.4 讨论 | 第45-46页 |
| 2.5 小结 | 第46-47页 |
| 第三章 免疫调节活性和粘附性能泡菜乳酸菌的筛选及抵抗沙门氏菌的研究 | 第47-64页 |
| 3.1 材料 | 第47-48页 |
| 3.1.1 细胞及菌株 | 第47-48页 |
| 3.1.2 试验动物 | 第48页 |
| 3.1.3 主要试剂和主要仪器 | 第48页 |
| 3.1.4 培养基及所需试剂的配制 | 第48页 |
| 3.2 方法 | 第48-55页 |
| 3.2.1 菌株的分离、培养及鉴定 | 第48-49页 |
| 3.2.2 Caco-2 细胞的培养 | 第49-50页 |
| 3.2.3 脾脏单核细胞的制备 | 第50-51页 |
| 3.2.4 乳酸菌抵抗胃肠道环境的试验 | 第51-52页 |
| 3.2.5 乳酸菌的抑菌试验 | 第52页 |
| 3.2.6 乳酸菌对肠上皮细胞的粘附试验 | 第52-53页 |
| 3.2.7 乳酸菌抑制沙门氏菌对上皮细胞的粘附和侵染 | 第53-55页 |
| 3.2.8 乳酸菌的免疫活性试验 | 第55页 |
| 3.2.9 试验数据分析 | 第55页 |
| 3.3 试验结果 | 第55-62页 |
| 3.3.1 乳酸菌对胃肠道环境的耐受性 | 第55-57页 |
| 3.3.2 乳酸菌的鉴定结果 | 第57-58页 |
| 3.3.3 乳酸菌的抑菌活性 | 第58-60页 |
| 3.3.4 乳酸菌对上皮细胞的粘附 | 第60页 |
| 3.3.5 乳酸菌抑制沙门氏菌对上皮细胞的粘附和侵染 | 第60-61页 |
| 3.3.6 乳酸菌的免疫活性 | 第61-62页 |
| 3.4 讨论 | 第62-63页 |
| 3.5 小结 | 第63-64页 |
| 第四章 益生菌特性好及免疫调节活性强的乳酸菌的筛选 | 第64-84页 |
| 4.1 材料 | 第65页 |
| 4.1.1 细胞及菌株 | 第65页 |
| 4.1.2 试验动物 | 第65页 |
| 4.1.3 主要试剂和主要仪器 | 第65页 |
| 4.1.4 培养基及所需试剂的配制 | 第65页 |
| 4.2 方法 | 第65-70页 |
| 4.2.1 菌株的分离、培养及鉴定 | 第65-66页 |
| 4.2.2 Caco-2 细胞的培养 | 第66页 |
| 4.2.3 脾脏单核细胞的制备 | 第66页 |
| 4.2.4 乳酸菌抵抗胃肠道环境的试验 | 第66-67页 |
| 4.2.5 乳酸菌的抑菌试验及机制研究 | 第67页 |
| 4.2.6 乳酸菌对肠上皮细胞的粘附试验及机制研究 | 第67-68页 |
| 4.2.7 乳酸菌的免疫活性试验及机制研究 | 第68页 |
| 4.2.8 乳酸菌抑制沙门氏菌对上皮细胞的粘附和侵染及机制研究 | 第68-70页 |
| 4.2.9 试验数据分析 | 第70页 |
| 4.3 试验结果 | 第70-81页 |
| 4.3.1 乳酸菌对胃肠道环境的耐受性 | 第70-71页 |
| 4.3.2 乳酸菌的鉴定结果 | 第71-73页 |
| 4.3.3 乳酸菌的抑菌活性及抑菌机制 | 第73-76页 |
| 4.3.4 乳酸菌对上皮细胞的粘附及粘附机制 | 第76-77页 |
| 4.3.5 乳酸菌的免疫活性及免疫机制 | 第77-79页 |
| 4.3.6 乳酸菌抑制沙门氏菌对上皮细胞的粘附和侵染及机制 | 第79-81页 |
| 4.4 讨论 | 第81-83页 |
| 4.5 小结 | 第83-84页 |
| 第五章 乳酸菌对雏鸡感染沙门氏菌的保护作用及机理研究 | 第84-94页 |
| 5.1 材料 | 第85页 |
| 5.1.1 菌株 | 第85页 |
| 5.1.2 试验动物 | 第85页 |
| 5.1.3 主要试剂和主要仪器 | 第85页 |
| 5.1.4 培养基及所需试剂的配制 | 第85页 |
| 5.2 方法 | 第85-88页 |
| 5.2.1 乳酸菌的培养及处理 | 第85页 |
| 5.2.2 肠炎沙门氏菌的培养及处理 | 第85-86页 |
| 5.2.3 动物试验设计 | 第86-87页 |
| 5.2.4 检测沙门氏菌在肉鸡肝脏、脾脏和盲肠中的数量 | 第87页 |
| 5.2.5 血清中细胞因子含量的检测 | 第87页 |
| 5.2.6 试验数据分析 | 第87-88页 |
| 5.3 试验结果 | 第88-91页 |
| 5.3.1 乳酸菌体内抑制沙门氏菌在盲肠内的定植及对肝脏和脾脏的侵染 | 第88-89页 |
| 5.3.2 标准曲线的制备 | 第89-90页 |
| 5.3.3 血清中细胞因子的含量测定 | 第90-91页 |
| 5.4 讨论 | 第91-93页 |
| 5.5 小结 | 第93-94页 |
| 第六章 表达家禽抗炎细胞因子IL-10的工程乳酸菌的构建及其生物学活性的检测 | 第94-108页 |
| 6.1 材料 | 第95-96页 |
| 6.1.1 载体和菌种 | 第95页 |
| 6.1.2 试验动物 | 第95页 |
| 6.1.3 主要试剂和主要仪器 | 第95页 |
| 6.1.4 培养基及所需试剂的配制 | 第95-96页 |
| 6.2 方法 | 第96-100页 |
| 6.2.1 重组表达质粒的构建 | 第96-97页 |
| 6.2.2 乳酸菌感受态的制备及重组表达质粒的电转 | 第97-99页 |
| 6.2.3 表达蛋白cIL-10的分离及检测 | 第99页 |
| 6.2.4 表达蛋白cIL-10生物学活性的检测 | 第99-100页 |
| 6.2.5 工程菌株益生菌性能的检测 | 第100页 |
| 6.2.6 试验数据分析 | 第100页 |
| 6.3 试验结果 | 第100-106页 |
| 6.3.1 重组表达质粒的构建及鉴定 | 第100-102页 |
| 6.3.2 表达蛋白cIL-10的定量和定性 | 第102-103页 |
| 6.3.3 表达蛋白cIL-10的生物学活性 | 第103-104页 |
| 6.3.4 工程菌株的益生菌性能 | 第104-106页 |
| 6.4 讨论 | 第106-107页 |
| 6.5 小结 | 第107-108页 |
| 第七章 结论与创新点 | 第108-109页 |
| 7.1 研究结论 | 第108页 |
| 7.2 创新点 | 第108页 |
| 7.3 下一步的研究思路 | 第108-109页 |
| 参考文献 | 第109-121页 |
| 附录 | 第121-140页 |
| 缩略语中英文对照 | 第140-142页 |
| 致谢 | 第142-143页 |
| 作者简介 | 第143页 |
