| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 前言 | 第14-16页 |
| 文献综述 | 第16-27页 |
| 第一章 长链非编码RNA研究进展 | 第16-27页 |
| 1.1 长链非编码RNA的发现 | 第16-17页 |
| 1.2 长链非编码RNA的分类 | 第17-18页 |
| 1.2.1 基于基因组位置的分类 | 第17-18页 |
| 1.2.2 基于细胞定位的分类 | 第18页 |
| 1.3 长链非编码RNA的特点 | 第18-19页 |
| 1.4 长链非编码RNA的作用机制 | 第19-20页 |
| 1.5 lncRNAs与miRNAs的调控关系 | 第20-22页 |
| 1.5.1 lncRNAs竞争性结合miRNAs，调控基因表达 | 第20-21页 |
| 1.5.2 lncRNAs阻碍miRNAs介导的基因沉默 | 第21-22页 |
| 1.5.3 lncRNAs通过编码miRNAs调控细胞分化 | 第22页 |
| 1.5.4 miRNAs调控lncRNAs启动子区甲基化 | 第22页 |
| 1.6 lncRNAs与脂肪生成 | 第22-25页 |
| 1.6.1 SRA与脂肪生成 | 第23-24页 |
| 1.6.2 lnc-RAP-n与脂肪生成 | 第24页 |
| 1.6.3 HOTAIR与脂肪生成 | 第24页 |
| 1.6.4 PU.1 AS lncRNA与脂肪生成 | 第24页 |
| 1.6.5 slincRAD与脂肪生成 | 第24-25页 |
| 1.6.6 ADINR与脂肪生成 | 第25页 |
| 1.6.7 NEAT1与脂肪生成 | 第25页 |
| 1.7 lncRNAs在牛上的研究现状 | 第25-27页 |
| 试验研究 | 第27-87页 |
| 第二章 调控秦川牛脂肪细胞分化的lncRNAs鉴定 | 第27-45页 |
| 2.1 材料与方法 | 第27-32页 |
| 2.1.1 样品采集 | 第27页 |
| 2.1.2 牛脂肪细胞原代培养 | 第27-28页 |
| 2.1.3 牛脂肪细胞诱导分化及油红O染色 | 第28页 |
| 2.1.4 测序文库制备及上机测序 | 第28-29页 |
| 2.1.5 测序数据评估及分析 | 第29-30页 |
| 2.1.6 lncRNAs鉴定 | 第30页 |
| 2.1.7 lncRNAs重注释及差异表达分析 | 第30-31页 |
| 2.1.8 RNA提取、cDNA合成及实时荧光定量PCR | 第31-32页 |
| 2.2 结果与分析 | 第32-41页 |
| 2.2.1 秦川牛前体脂肪细胞培养及诱导分化 | 第32-33页 |
| 2.2.2 前体脂肪细胞和成熟脂肪细胞的RNA提取和质检 | 第33页 |
| 2.2.3 脂肪细胞lncRNAs高通量测序 | 第33-35页 |
| 2.2.4 分化前后脂肪细胞lncRNAs鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.5 lncRNAs特征分析 | 第36-39页 |
| 2.2.6 lncRNAs保守性分析 | 第39-40页 |
| 2.2.7 差异表达lncRNAs分析及qRT-PCR验证 | 第40-41页 |
| 2.3 讨论 | 第41-44页 |
| 2.4 小结 | 第44-45页 |
| 第三章 长链非编码RNA ADNCR调控脂肪细胞分化的机理研究 | 第45-65页 |
| 3.1 材料与方法 | 第45-50页 |
| 3.1.1 脂肪细胞培养、诱导分化和油红O染色 | 第45页 |
| 3.1.2 cDNA末端快速扩增 (Rapid amplification of cDNA ends, RACE) | 第45页 |
| 3.1.3 载体构建及病毒包装 | 第45-47页 |
| 3.1.4 原核表达 | 第47-48页 |
| 3.1.5 细胞质和细胞核RNA分离 | 第48页 |
| 3.1.6 双荧光素酶活性分析 | 第48-49页 |
| 3.1.7 半定量PCR | 第49页 |
| 3.1.8 lncRNA荧光原位杂交（FISH | 第49页 |
| 3.1.9 RNA提取、cDNA合成及实时荧光定量PCR | 第49页 |
| 3.1.10 蛋白印迹（Western Blot） | 第49-50页 |
| 3.1.11 统计分析 | 第50页 |
| 3.2 结果与分析 | 第50-62页 |
| 3.2.1 长链非编码RNA ADNCR序列特征 | 第50-51页 |
| 3.2.2 ADNCR的细胞定位 | 第51-52页 |
| 3.2.3 Ad-ADNCR、Ad-shSIRT1和Ad-miR-204腺病毒包装 | 第52-54页 |
| 3.2.4 ADNCR抑制脂肪细胞分化 | 第54-55页 |
| 3.2.5 ADNCR cis作用分析 | 第55-56页 |
| 3.2.6 ADNCR是miR-204的一个靶基因 | 第56-57页 |
| 3.2.7 ADNCR能够竞争性结合miR-204 | 第57-58页 |
| 3.2.8 SIRT1是miR-204的一个靶基因 | 第58-59页 |
| 3.2.9 miR-204通过抑制SIRT1促进脂肪细胞分化 | 第59-60页 |
| 3.2.10 ADNCR通过竞争性结合miR-204调控SIRT1表达 | 第60-62页 |
| 3.3 讨论 | 第62-64页 |
| 3.4 小结 | 第64-65页 |
| 第四章 白藜芦醇和烟酰胺通过SIRT1调控牛脂肪细胞分化 | 第65-74页 |
| 4.1 材料与方法 | 第65-66页 |
| 4.1.1 脂肪细胞培养、诱导分化和油红O染色 | 第65页 |
| 4.1.2 细胞增殖试验 | 第65页 |
| 4.1.3 RNA提取、cDNA合成及实时荧光定量PCR | 第65-66页 |
| 4.1.4 SIRT1亚细胞定位 | 第66页 |
| 4.1.5 蛋白印迹（Western Blot） | 第66页 |
| 4.1.6 统计分析 | 第66页 |
| 4.2 结果与分析 | 第66-72页 |
| 4.2.1 白藜芦醇和烟酰胺调控牛前体脂肪细胞增殖 | 第66-67页 |
| 4.2.2 白藜芦醇和烟酰胺调控牛脂肪细胞分化 | 第67-68页 |
| 4.2.3 白藜芦醇和烟酰胺调节脂分化相关基因表达 | 第68-69页 |
| 4.2.4 SIRT1亚细胞定位和组织表达谱分析 | 第69-70页 |
| 4.2.5 白藜芦醇和烟酰胺依赖于SIRT1调控脂肪生成 | 第70-72页 |
| 4.3 讨论 | 第72-73页 |
| 4.4 小结 | 第73-74页 |
| 第五章 SIRT1启动子区SNPs对其活性的调节 | 第74-87页 |
| 5.1 材料与方法 | 第74-77页 |
| 5.1.1 样品采集 | 第74页 |
| 5.1.2 DNA提取及质量检测 | 第74页 |
| 5.1.3 SNPs扫描 | 第74-75页 |
| 5.1.4 SNPs分型 | 第75-76页 |
| 5.1.5 载体构建 | 第76页 |
| 5.1.6 荧光素酶活性分析 | 第76-77页 |
| 5.1.7 RNA提取、cDNA合成及实时荧光定量PCR | 第77页 |
| 5.1.8 数据统计与分析 | 第77页 |
| 5.2 结果与分析 | 第77-85页 |
| 5.2.1 SNPs检测 | 第77-79页 |
| 5.2.2 遗传多样性分析 | 第79-80页 |
| 5.2.3 连锁不平衡和单倍型分析 | 第80-81页 |
| 5.2.4 南阳牛群体中基因型与表型的相关性分析 | 第81-82页 |
| 5.2.5 SIRT1基因启动子活性分析 | 第82-83页 |
| 5.2.6 g.-382G>A和g.-274C>G位点不同单倍型对启动子活性的影响 | 第83-84页 |
| 5.2.7 SNP g.-382G>A产生了一个转录因子MEF2A的结合位点 | 第84页 |
| 5.2.8 g.-382G>A位点AA基因型降低SIRT1表达量 | 第84-85页 |
| 5.3 讨论 | 第85-86页 |
| 5.4 小结 | 第86-87页 |
| 结论与创新点 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-100页 |
| 附录 | 第100-113页 |
| 致谢 | 第113-114页 |
| 作者简介 | 第114-115页 |
