| 摘要 | 第8-10页 |
| 英文摘要 | 第10-11页 |
| 1 引言 | 第12-18页 |
| 1.1 研究目的与意义 | 第12页 |
| 1.2 文献综述 | 第12-16页 |
| 1.2.1 信号肽的概述 | 第12-14页 |
| 1.2.2 蛋白质糖基化的介绍 | 第14-16页 |
| 1.3 本论文的主要研究内容 | 第16-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-29页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-21页 |
| 2.1.1 菌株和载体 | 第18页 |
| 2.1.2 酶和主要生物化学试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 常用试剂的配置 | 第18-20页 |
| 2.1.4 培养基 | 第20页 |
| 2.1.5 主要实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-29页 |
| 2.2.1 黑曲霉基因组的提取 | 第21页 |
| 2.2.2 基因克隆 | 第21-25页 |
| 2.2.3 农杆菌介导法对黑曲霉的遗传转化 | 第25页 |
| 2.2.4 同源重组转化子的鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.5 重组菌株中木聚糖酶基因的表达检测 | 第26-28页 |
| 2.2.6 重组菌株的木聚糖酶活性测定 | 第28页 |
| 2.2.7 重组菌株中木聚糖酶的酶学性质 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-50页 |
| 3.1 木聚糖酶基因的改造 | 第29-34页 |
| 3.1.1 木聚糖酶xynBm2基因的扩增 | 第29-30页 |
| 3.1.2 木聚糖酶xynBm3基因的扩增 | 第30-31页 |
| 3.1.3 木聚糖酶xynBNG1基因的扩增 | 第31-32页 |
| 3.1.4 木聚糖酶xynBNG2基因的扩增 | 第32-33页 |
| 3.1.5 木聚糖酶xynBNG3基因的获得 | 第33-34页 |
| 3.2 表达载体的构建 | 第34-37页 |
| 3.3 农杆菌介导法对黑曲霉的遗传转化 | 第37-40页 |
| 3.3.1 农杆菌转化子的PCR鉴定 | 第37-40页 |
| 3.3.2 农杆菌介导法转化黑曲霉 | 第40页 |
| 3.4 同源重组菌株的鉴定 | 第40-44页 |
| 3.4.1 阳性转化子的鉴定 | 第40-42页 |
| 3.4.2 xynB基因同源重组转化子的筛选 | 第42-44页 |
| 3.5 重组菌株中木聚糖酶基因的表达检测 | 第44-47页 |
| 3.5.1 木聚糖酶转录水平检测 | 第44-45页 |
| 3.5.2 木聚糖酶的SDS-PAGE检测 | 第45-46页 |
| 3.5.3 木聚糖酶的酶活检测 | 第46-47页 |
| 3.6 木聚糖酶的酶学性质 | 第47-50页 |
| 3.6.1 温度对酶活力的影响及温度稳定性 | 第47-48页 |
| 3.6.2 pH对酶活力的影响 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-51页 |
| 4.1 信号肽和kozak序列对木聚糖酶基因表达的影响 | 第50页 |
| 4.2 糖基化对木聚糖酶基因表达的影响 | 第50-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 5.1 信号肽和kozak序列对木聚糖酶基因表达的影响 | 第51页 |
| 5.2 糖基化对木聚糖酶基因表达的影响 | 第51-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第57页 |