| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-19页 |
| 1.1 猪传染性胃肠炎的研究现状 | 第12-14页 |
| 1.1.1 病原学 | 第12-13页 |
| 1.1.2 TGEV S蛋白研究进展 | 第13页 |
| 1.1.3 TGEV致病与免疫机制 | 第13-14页 |
| 1.2 猪流行性腹泻的研究现状 | 第14-15页 |
| 1.2.1 病原学 | 第14页 |
| 1.2.2 PEDV S基因研究进展 | 第14-15页 |
| 1.2.3 PEDV致病与免疫机制 | 第15页 |
| 1.3 绿色荧光蛋白的研究进展 | 第15页 |
| 1.4 TGE与PED疫苗研究现状 | 第15-16页 |
| 1.4.1 灭活疫苗 | 第16页 |
| 1.4.2 弱毒疫苗 | 第16页 |
| 1.4.3 基因工程疫苗 | 第16页 |
| 1.5 黏膜免疫的研究现状 | 第16-17页 |
| 1.6 乳酸菌作为口服疫苗载体的研究现状 | 第17页 |
| 1.7 研究目的与意义 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-37页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 菌种、病毒株、细胞及质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 抗体 | 第19页 |
| 2.1.3 实验动物 | 第19页 |
| 2.1.4 主要分子生物学试剂 | 第19页 |
| 2.1.5 引物 | 第19-20页 |
| 2.1.6 主要实验仪器与设备 | 第20页 |
| 2.2 实验方法 | 第20-37页 |
| 2.2.1 目的基因的获得 | 第20-24页 |
| 2.2.2 目的基因片段 6Ds-ps420的连接 | 第24-26页 |
| 2.2.3 重组干酪乳杆菌的构建 | 第26-28页 |
| 2.2.4 重组干酪乳杆菌Western Blot表达鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.5 表达EGFP-6Ds-ps420融合蛋白干酪乳杆菌的构建 | 第29-33页 |
| 2.2.6 去除抗生素基因的重组干酪乳酸菌的构建及鉴定 | 第33-34页 |
| 2.2.7 重组干酪乳杆菌口服免疫小鼠特异性抗体的测定 | 第34-35页 |
| 2.2.8 重组干酪乳杆菌口服免疫小鼠后对脾细胞增殖的影响 | 第35页 |
| 2.2.9 中和效价的测定 | 第35-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-53页 |
| 3.1 表达 6Ds-ps420重组干酪乳杆菌的构建 | 第37-40页 |
| 3.1.1 6Ds-ps420目的基因的获得 | 第37-39页 |
| 3.1.2 重组质粒pPG-T7g10-6Ds-ps420鉴定结果 | 第39-40页 |
| 3.2 重组干酪乳杆菌表达鉴定结果 | 第40-41页 |
| 3.3 表达EGFP-6Ds-ps420重组干酪乳杆菌的构建 | 第41-43页 |
| 3.3.1 EGFP目的基因的获得 | 第41-42页 |
| 3.3.2 重组质粒pPG-T7g10-EGFP-6Ds-ps420T鉴定结果 | 第42-43页 |
| 3.4 pPG-T7g10-EGFP-6Ds-ps420/L.casei393 表达鉴定结果 | 第43-45页 |
| 3.4.1 Western blot实验鉴定结果 | 第43-44页 |
| 3.4.2 激光共聚焦检测结果 | 第44-45页 |
| 3.5 非抗性重组乳酸菌的筛选 | 第45-46页 |
| 3.5.1 非抗性重组乳酸菌菌落PCR鉴定 | 第45页 |
| 3.5.2 氯霉素基因缺失的验证结果 | 第45-46页 |
| 3.6 重组无抗性乳酸菌Western blot鉴定表达结果 | 第46-48页 |
| 3.7 重组干酪乳杆菌口服免疫小鼠特异性抗体的测定 | 第48-51页 |
| 3.7.1 免疫小鼠粪便中特异性Ig A检测结果 | 第48页 |
| 3.7.2 免疫小鼠阴道洗液中特异性Ig A检测结果 | 第48-50页 |
| 3.7.3 免疫小鼠血清中特异性抗体Ig G测定 | 第50-51页 |
| 3.8 脾淋巴细胞增殖试验 | 第51-52页 |
| 3.8.1 TGEV 6Ds蛋白抗原刺激脾淋巴细胞增殖实验 | 第51页 |
| 3.8.2 PEDV ps420蛋白抗原刺激脾淋巴细胞增殖实验 | 第51-52页 |
| 3.9 抗体中和效价检测结果 | 第52-53页 |
| 4 讨论 | 第53-56页 |
| 4.1 PEDV和TGEV免疫保护性抗原的选择 | 第53页 |
| 4.2 EGFP作为报告基因取代抗药基因 | 第53-54页 |
| 4.3 乳酸菌表达载体的选择 | 第54页 |
| 4.4 重组乳酸菌免疫效果评价 | 第54-56页 |
| 5 结论 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第62页 |
