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植物青枯菌Po82菌株致病力分化相关基因的分离及其功能研究

摘要第1-6页
Abstract第6-13页
第一章 引言第13-38页
   ·青枯菌第13-19页
     ·青枯菌及其引起的病害第13-14页
     ·青枯菌的传统分类第14-15页
     ·青枯菌种以下演化型分类框架第15-17页
     ·青枯菌 Po82 菌株简介第17-19页
   ·青枯菌全基因组学研究进展第19-27页
     ·全基因组测序技术的发展第19-20页
     ·比较基因组学第20-21页
     ·泛基因组第21-22页
     ·青枯菌全基因组学研究进展第22-27页
   ·III 型分泌系统第27-37页
     ·病原细菌的分泌系统第27-29页
     ·III 型分泌系统第29-37页
   ·本研究目的、意义及技术路线第37-38页
     ·本研究目的及意义第37页
     ·技术路线第37-38页
第二章 青枯菌 Po82 菌株比较基因组学研究第38-65页
   ·实验材料第38-40页
     ·供试菌株、质粒及培养条件第38-39页
     ·主要试剂第39页
     ·培养基第39-40页
   ·实验方法第40-47页
     ·Po82 菌株抑制性差减杂交文库的构建第40-46页
     ·Po82 菌株全基因组序列生物信息学分析第46-47页
   ·结果第47-61页
     ·抑制性差减杂交文库的构建及分析第47-55页
     ·Po82 菌株基因组分析第55-61页
   ·结论与讨论第61-65页
     ·抑制性差减杂交文库的构建及分析第61-62页
     ·Po82 菌株全基因组序列分析第62-64页
     ·候选基因的确定第64-65页
第三章 Po82 菌株 III 型分泌系统调控基因 hrpB 的功能研究第65-81页
   ·实验材料第65-67页
     ·供试菌株、质粒及培养条件第65-66页
     ·培养基第66-67页
     ·主要试剂第67页
   ·实验方法第67-72页
     ·hrpB 基因生物信息学分析第67页
     ·hrpB 基因重组自杀质粒的构建及鉴定第67-69页
     ·感受态细胞的制备及电转化第69页
     ·突变株的筛选与鉴定第69-70页
     ·互补载体的构建及鉴定第70页
     ·互补菌株的筛选与鉴定第70页
     ·致病力测定第70-71页
     ·Po82 菌株总 RNA 的提取第71页
     ·半定量 RT-PCR第71-72页
     ·生长曲线的测定第72页
     ·运动性检测第72页
   ·结果第72-79页
     ·hrpB 基因生物信息学分析第72-74页
     ·hrpB 基因重组自杀质粒的构建第74-75页
     ·hrpB 基因突变株的构建第75页
     ·互补菌株的构建第75-76页
     ·致病力测定结果第76-77页
     ·半定量 RT-PCR 分析第77页
     ·生长曲线的测定第77-78页
     ·运动性测定第78-79页
   ·结论与讨论第79-81页
第四章 Po82 菌株 III 型效应子 HopAF1 的功能研究第81-105页
   ·实验材料第81-82页
     ·供试菌株、质粒及培养条件第81-82页
     ·培养基第82页
     ·主要试剂第82页
   ·实验方法第82-90页
     ·hopAF1 基因生物信息学分析第82页
     ·hopAF1 基因在青枯菌种群中的分布第82-83页
     ·hopAF1 基因重组自杀质粒的构建及鉴定第83-84页
     ·感受态细胞的制备及电转化第84页
     ·hopAF1 基因突变菌株的筛选与鉴定第84页
     ·互补载体的构建及鉴定第84页
     ·互补菌株的筛选与鉴定第84页
     ·致病力测定第84-85页
     ·半定量 RT-PCR第85页
     ·基于 Gateway 技术构建表达载体第85-87页
     ·腺苷酸环化酶转导实验第87-89页
     ·GFP 载体的构建第89-90页
     ·生长曲线的测定第90页
     ·运动性检测第90页
     ·生物被膜形成测定第90页
   ·结果第90-103页
     ·hopAF1 基因生物信息学分析第90-92页
     ·hopAF1 基因在青枯菌种群中的分布第92页
     ·hopAF1 基因重组自杀质粒的构建第92-93页
     ·hopAF1 基因突变株的构建第93页
     ·互补菌株的构建与鉴定第93-94页
     ·致病力测定第94-96页
     ·半定量 RT-PCR 分析第96页
     ·基于 Gateway 技术表达载体的构建及青枯菌的转化第96-97页
     ·腺苷酸环化酶转导实验第97-100页
     ·GFP 载体的构建第100-101页
     ·生长曲线的测定第101页
     ·运动性检测第101-102页
     ·生物被膜形成测定第102-103页
   ·结论与讨论第103-105页
第五章 四个 Po82 菌株特异基因的功能研究第105-130页
   ·实验材料第105-106页
     ·供试菌株、质粒及培养条件第105-106页
     ·培养基第106页
     ·主要试剂第106页
   ·实验方法第106-110页
     ·候选基因的生物信息学分析第106页
     ·候选重组自杀质粒的构建及鉴定第106-108页
     ·感受态细胞的制备及电转化第108页
     ·基因突变株的筛选与鉴定第108页
     ·互补载体的构建及鉴定第108-109页
     ·互补菌株的筛选与鉴定第109页
     ·致病力测定第109页
     ·半定量 RT-PCR第109-110页
     ·生长曲线的测定第110页
     ·运动性测定第110页
     ·生物被膜形成的测定第110页
   ·结果第110-127页
     ·MarR 转录调控因子家族基因 m00553 的功能研究第110-115页
     ·转录调控因子编码基因 c01536 的功能研究第115-116页
     ·III 型效应子编码基因 c00283 的功能研究第116-122页
     ·III 型效应子编码基因 m00778 的功能研究第122-127页
   ·结论与讨论第127-130页
     ·转录调控因子编码基因第128页
     ·III 型效应子编码基因第128-130页
第六章 Po82 菌株 III 型效应子 AvrPtoB 和 XopX 类似物功能研究第130-150页
   ·实验材料第130-131页
     ·供试菌株、质粒及培养条件第130-131页
     ·培养基第131页
     ·主要试剂第131页
   ·实验方法第131-134页
     ·基因生物信息学分析第131页
     ·重组自杀质粒的构建及鉴定第131-132页
     ·感受态细胞的制备及电转化第132页
     ·突变株的筛选与鉴定第132页
     ·互补载体的构建及鉴定第132-133页
     ·互补菌株的筛选与鉴定第133页
     ·致病力测定第133页
     ·半定量 RT-PCR第133-134页
     ·生长曲线的测定第134页
     ·运动性检测第134页
     ·生物被膜形成的测定第134页
   ·结果第134-148页
     ·c01857 基因功能研究第134-141页
     ·m00718 基因功能研究第141-148页
   ·结论与讨论第148-150页
第七章 全文结论第150-152页
附录第152-160页
参考文献第160-174页
致谢第174-175页
作者简介第175页

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