| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-34页 |
| 1.1 细胞周期和细胞周期蛋白 | 第13-16页 |
| 1.1.1 细胞周期 | 第13-14页 |
| 1.1.2 简介有丝分裂过程 | 第14-15页 |
| 1.1.3 简介减数分裂过程 | 第15-16页 |
| 1.2 细胞周期蛋白是细胞周期调控机制的关键组分 | 第16-18页 |
| 1.3 Cyclin A1蛋白在减数分裂中的作用研究 | 第18-26页 |
| 1.3.1 Cyclin A型周期蛋白 | 第18-20页 |
| 1.3.2 Cyclin A1在雄性生殖细胞系中的作用研究 | 第20-24页 |
| 1.3.3 CyclinA1在雌性生殖细胞系中的作用研究 | 第24页 |
| 1.3.4 CyclinA1在生殖细胞系中的调控机制研究 | 第24-25页 |
| 1.3.5 有待解决的问题 | 第25-26页 |
| 1.4 嗜热四膜虫是研究减数分裂基因功能和进化的良好模式生物 | 第26-32页 |
| 1.4.1 四膜虫的生物学特征 | 第26-27页 |
| 1.4.2 嗜热四膜虫在基因功能和进化研究中的优势 | 第27-28页 |
| 1.4.3 嗜热四膜虫具有成熟的基因重组技术 | 第28页 |
| 1.4.4 嗜热四膜虫具有成熟的细胞学研究技术 | 第28-29页 |
| 1.4.5 总结嗜热四膜虫减数分裂研究进展 | 第29-31页 |
| 1.4.6 嗜热四膜虫细胞周期蛋白的研究进展总结 | 第31-32页 |
| 1.5 本研究的工作背景、目的和意义 | 第32-34页 |
| 1.5.1 研究工作的背景 | 第32-33页 |
| 1.5.2 研究工作的目的和意义 | 第33-34页 |
| 第二章 嗜热四膜虫Cyc17基因的生物信息学分析 | 第34-38页 |
| 2.1 材料及方法 | 第34-35页 |
| 2.1.1 嗜热四膜虫Cyc17基因的查找 | 第34页 |
| 2.1.2 嗜热四膜虫Cyc17基因的同源比对分析 | 第34-35页 |
| 2.2 结果 | 第35-36页 |
| 2.2.1.四膜虫Cyc17基因全长、CDS区域以及编码的氨基酸 | 第35页 |
| 2.2.2 四膜虫Cyc17基因与哺乳类CyclinA1基因是同源基因 | 第35-36页 |
| 2.3 小结及讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 嗜热四膜虫Cyc17基因的敲除及功能分析 | 第38-64页 |
| 3.1 主要实验材料 | 第38-41页 |
| 3.1.1 嗜热四膜虫细胞株 | 第38页 |
| 3.1.2 菌株和质粒 | 第38页 |
| 3.1.3 部分试剂的配置 | 第38-39页 |
| 3.1.4 主要实验试剂 | 第39-40页 |
| 3.1.5 主要实验仪器及设备 | 第40页 |
| 3.1.6 本实验主要用到的引物 | 第40-41页 |
| 3.2 主要实验方法 | 第41-57页 |
| 3.2.1 四膜虫细胞的培养与传代 | 第41-42页 |
| 3.2.2 四膜虫基因组DNA的提取 | 第42页 |
| 3.2.3 嗜热四膜虫Cyc17基因敲除载体的构建 | 第42-47页 |
| 3.2.4 嗜热四膜虫的基因枪转染 | 第47-49页 |
| 3.2.5 全细胞裂解PCR | 第49-50页 |
| 3.2.6 用PCR鉴定敲除细胞株 | 第50页 |
| 3.2.7 总RNA的提取 | 第50-51页 |
| 3.2.8 cDNA的合成 | 第51-52页 |
| 3.2.9 实时荧光定量PCR | 第52页 |
| 3.2.10四膜虫Cyc17基因的敲除细胞株的保种 | 第52-53页 |
| 3.2.11鉴定Cyc17敲除细胞株配对率的实验 | 第53-54页 |
| 3.2.12观察Cyc17敲除细胞株核发育实验 | 第54页 |
| 3.2.13 Cyc17敲除细胞株Giemsa染色实验 | 第54-55页 |
| 3.2.14 Cyc17敲除细胞株荧光原位杂交(FISH)实验 | 第55-56页 |
| 3.2.15 Cyc17敲除细胞株后代成活率检测 | 第56-57页 |
| 3.3 实验结论 | 第57-62页 |
| 3.3.1 基因序列的扩增及回收 | 第57-58页 |
| 3.3.2 Fusion PCR连接Cyc17同源臂片段和Neo4片段 | 第58页 |
| 3.3.3 重组子的PCR鉴定 | 第58页 |
| 3.3.4 鉴定嗜热四膜虫Cyc17基因两种不同交配型的敲除细胞株 | 第58-59页 |
| 3.3.5 敲除Cyc17基因，对嗜热四膜虫的配对不产生影响 | 第59页 |
| 3.3.6 敲除Cyc17基因，影响嗜热四膜虫在接合生殖时期的小核正常发育 | 第59-60页 |
| 3.3.7 敲除Cyc17基因，嗜热四膜虫在减数分裂过程中能正常的完成同源重组 | 第60-61页 |
| 3.3.8 敲除Cyc17基因，嗜热四膜虫减数分裂的小核在Diakinesis-metaphase I阶段停止发育 | 第61页 |
| 3.3.9 敲除Cyc17基因后，嗜热四膜虫没有成活的后代产生 | 第61-62页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第62-64页 |
| 总结及展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-77页 |
| 攻读硕士期间发表论文情况 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
