| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 引言 | 第14-20页 |
| 0.1 硒与硒蛋白 | 第14页 |
| 0.2 硒生物学功能 | 第14-15页 |
| 0.3 硒蛋白表达及定位 | 第15-17页 |
| 0.4 果蝇硒蛋白 | 第17-18页 |
| 0.5 硒诱导细胞凋亡 | 第18-20页 |
| 第1章 果蝇硒蛋白dSelK及人同源蛋白SelK截短质粒构建 | 第20-33页 |
| 1.1 实验目的 | 第20页 |
| 1.2 实验方案 | 第20-22页 |
| 1.3 实验材料 | 第22-25页 |
| 1.3.1 质粒 | 第22页 |
| 1.3.2 引物 | 第22-23页 |
| 1.3.3 酶及试剂盒 | 第23页 |
| 1.3.4 实验药品和生化试剂 | 第23-24页 |
| 1.3.5 实验仪器 | 第24-25页 |
| 1.3.6 实验常用Mark及试剂配制 | 第25页 |
| 1.4 实验方法 | 第25-29页 |
| 1.4.1 制Kan,Amp LB平板,配液体LB培养基(总体积500ml) | 第26页 |
| 1.4.2 菌种活化 | 第26页 |
| 1.4.3 质粒提取 | 第26页 |
| 1.4.4 PCR扩增目的片段 | 第26-27页 |
| 1.4.5 载体与目的片段的双酶切 | 第27-28页 |
| 1.4.6 载体与目的片段的连接 | 第28页 |
| 1.4.7 转化 | 第28页 |
| 1.4.8 阳性重组子的筛选 | 第28-29页 |
| 1.5 实验结果 | 第29-31页 |
| 1.5.1 质粒小提结果 | 第29页 |
| 1.5.2 PCR结果 | 第29-30页 |
| 1.5.3 胶回收纯化结果 | 第30页 |
| 1.5.4 重组子质粒小提结果 | 第30-31页 |
| 1.5.5 质粒测序结果 | 第31页 |
| 1.6 分析与讨论 | 第31-32页 |
| 1.7 小结 | 第32-33页 |
| 第2章 截短质粒对胃癌823细胞内钙离子的影响 | 第33-42页 |
| 2.1 实验目的 | 第33页 |
| 2.2 实验材料 | 第33-34页 |
| 2.2.1 耗材 | 第33页 |
| 2.2.2 细胞及质粒 | 第33页 |
| 2.2.3 培养基及试剂 | 第33-34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-35页 |
| 2.3.1 细胞转染(转染试剂lipoD293TM DNA In Virto Transfection Reagent) | 第34页 |
| 2.3.2 Fluo-3/AM钙离子探针染色 | 第34-35页 |
| 2.3.3 流式检测 | 第35页 |
| 2.4 实验结果 | 第35-40页 |
| 2.4.1 实验组转染质粒在人胃癌823细胞中表达 | 第35-37页 |
| 2.4.2 Fluo-3/AM探针处理流式检测结果 | 第37-40页 |
| 2.5 分析与讨论 | 第40页 |
| 2.6 小结 | 第40-42页 |
| 第3章 截短质粒诱导人胃癌823细胞凋亡情况 | 第42-48页 |
| 3.1 实验目的 | 第42页 |
| 3.2 实验材料 | 第42-43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43页 |
| 3.3.1 细胞转染 | 第43页 |
| 3.3.2 收集细胞 | 第43页 |
| 3.3.3 悬浮细胞 | 第43页 |
| 3.3.4 加Annexin V-DE | 第43页 |
| 3.3.5 流式检测 | 第43页 |
| 3.4 实验结果 | 第43-46页 |
| 3.4.1 Annexin DE/T-AAD细胞凋亡检测试剂盒处理流式检测结果 | 第43-45页 |
| 3.4.2 流式结果统计 | 第45-46页 |
| 3.5 分析与讨论 | 第46-47页 |
| 3.6 小结 | 第47-48页 |
| 第4章 pET-30a-dSelK质粒构建及His融合蛋白表达 | 第48-60页 |
| 4.1 实验目的 | 第48页 |
| 4.2 实验材料 | 第48-49页 |
| 4.2.1 菌种与质粒 | 第48页 |
| 4.2.2 酶 | 第48页 |
| 4.2.3 引物 | 第48-49页 |
| 4.2.4 蛋白marker | 第49页 |
| 4.3 实验方案 | 第49-50页 |
| 4.4 实验方法 | 第50-53页 |
| 4.4.1 质粒构建 | 第51页 |
| 4.4.2 pET-30a-dSelK蛋白表达 | 第51-52页 |
| 4.4.3 上样蛋白制备 | 第52页 |
| 4.4.4 蛋白电泳检测 | 第52-53页 |
| 4.5 实验结果 | 第53-58页 |
| 4.5.1 质粒pET-30a-VP3、pGM-T-dSelK的提取 | 第53-54页 |
| 4.5.2 pET-30a-VP3双酶切 | 第54-55页 |
| 4.5.3 dSelK PCR体外扩增 | 第55-56页 |
| 4.5.4 胶回收纯化PCR小片段 | 第56页 |
| 4.5.5 载体及插入片段纯化 | 第56-57页 |
| 4.5.6 重组子小提结果 | 第57页 |
| 4.5.7 质粒测序结果 | 第57页 |
| 4.5.8 原核表达融合蛋白电泳图 | 第57-58页 |
| 4.6 分析与讨论 | 第58-59页 |
| 4.7 小结 | 第59-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 1. 果蝇硒蛋白dSelK及人同源硒蛋白SelK截短人细胞表达质粒构建 | 第60页 |
| 2. 果蝇硒蛋白dSelK及人同源硒蛋白SelK调控胃癌细胞变化 | 第60页 |
| 3. pET-30a-dSelK质粒构建及His-dSelK融合蛋白表达 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-66页 |
| 附录 | 第66-74页 |
| 1、pE-DSelK(Turn)-Dsred2测序结果 | 第66-67页 |
| 2、pE-Selk(Turn)-Dsred2测序结果 | 第67-68页 |
| 3、DSelK蛋白PROST-Ⅱ预测结果 | 第68-70页 |
| 4、Selk蛋白PROST-Ⅱ预测结果 | 第70-73页 |
| 5、pET-30a-DSelK测序结果 | 第73-74页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及参加科研情况 | 第74页 |
