| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略词、中英文术语对照表 | 第10-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-31页 |
| 1.1 胰腺癌 | 第15-18页 |
| 1.1.1 胰腺癌治疗现状 | 第15-16页 |
| 1.1.2 胰腺癌肿瘤微环境 | 第16-17页 |
| 1.1.3 胰腺星状细胞 | 第17-18页 |
| 1.2 基因治疗 | 第18-19页 |
| 1.3 基因输送技术 | 第19-23页 |
| 1.3.1 病毒基因输送 | 第19-20页 |
| 1.3.2 非病毒基因输送 | 第20-23页 |
| 1.3.2.1 阳离子脂质体 | 第21页 |
| 1.3.2.2 阳离子聚合物 | 第21-23页 |
| 1.4 非病毒基因输送的障碍 | 第23-27页 |
| 1.4.1 体内循环 | 第23页 |
| 1.4.2 肿瘤微环境和胞外基质 | 第23-25页 |
| 1.4.3 细胞内吞 | 第25-26页 |
| 1.4.4 胞内运输 | 第26页 |
| 1.4.5 入核 | 第26页 |
| 1.4.6 非病毒基因转染效率的差异性 | 第26-27页 |
| 1.5 Trail凋亡通路 | 第27-29页 |
| 1.5.1 Trail蛋白的旁观者效应(bysander effect) | 第27-28页 |
| 1.5.2 Trail在肿瘤治疗中的应用 | 第28-29页 |
| 1.6 课题的提出 | 第29-31页 |
| 第二章 非病毒载体筛选及转染机理探究 | 第31-49页 |
| 2.1 引言 | 第31页 |
| 2.2 实验材料和仪器 | 第31-34页 |
| 2.2.1 实验材料和试剂 | 第31-32页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第32-33页 |
| 2.2.3 实验用细胞系 | 第33页 |
| 2.2.4 工作溶液 | 第33-34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-38页 |
| 2.3.1 菌体的扩增和质粒的提取 | 第34-35页 |
| 2.3.1.1 大肠杆菌的培养 | 第34-35页 |
| 2.3.1.2 质粒的提取 | 第35页 |
| 2.3.2 Polyplex的制备 | 第35页 |
| 2.3.3 Lipo 2000/DNA脂质体纳米复合物的制备 | 第35页 |
| 2.3.4 纳米复合物的粒径分布 | 第35页 |
| 2.3.5 细胞水平的转染实验 | 第35-38页 |
| 2.3.5.1 荧光素酶质粒转染实验 | 第35-36页 |
| 2.3.5.2 增强型绿色荧光蛋白质粒转染实验 | 第36页 |
| 2.3.5.3 激光共聚焦显微镜下增强型绿色荧光蛋白的表达 | 第36-37页 |
| 2.3.5.4 激光共聚焦显微镜下增强型绿色荧光蛋白的表达 | 第37页 |
| 2.3.5.5 激光共聚焦显微镜下纳米复合物的亚细胞分布 | 第37页 |
| 2.3.5.6 细胞内吞抑制剂对细胞摄取纳米复合物的影响 | 第37-38页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第38-48页 |
| 2.4.1 纳米复合物的粒径分布 | 第38页 |
| 2.4.2 纳米复合物细胞水平转染实验 | 第38-46页 |
| 2.4.2.1 焚光素酶质粒的转染 | 第38-42页 |
| 2.4.2.2 增强型绿色荧光蛋白质粒的转染 | 第42-43页 |
| 2.4.2.3 BxPC-3细胞和PSCs共培养转染报告基因 | 第43-46页 |
| 2.4.3 激光共聚焦显微镜下纳米复合物的亚细胞分布 | 第46-47页 |
| 2.4.4 内吞抑制剂对细胞摄取纳米复合物的影响 | 第47-48页 |
| 2.5 本章小结 | 第48-49页 |
| 第三章 体外共培养模型中细胞毒性评价 | 第49-63页 |
| 3.1 引言 | 第49页 |
| 3.2 实验材料和仪器 | 第49-51页 |
| 3.2.1 实验材料和试剂 | 第49-50页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第50页 |
| 3.2.3 实验用细胞系 | 第50页 |
| 3.2.4 工作溶液 | 第50-51页 |
| 3.3 实验方法 | 第51-54页 |
| 3.3.1 质粒的定点突变 | 第51页 |
| 3.3.2 质粒的转化和菌种保藏 | 第51页 |
| 3.3.3 细胞毒性实验 | 第51-52页 |
| 3.3.4 共培养实验 | 第52-54页 |
| 3.3.4.1 BxPC-3-Luci-GFP细胞与PSCs共培养转染pEGFP-TRAIL实验 | 第52-53页 |
| 3.3.4.2 BxPC-3-Luci-GFP细胞与PSCs共培养转染pTRAIL实验 | 第53-54页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第54-62页 |
| 3.4.1 质粒定点突变结果 | 第54页 |
| 3.4.2 pEGFP- TRAIL转染实验 | 第54-60页 |
| 3.4.3 细胞毒性实验 | 第60-62页 |
| 3.5 本章小结 | 第62-63页 |
| 第四 纳米复合物的修饰及体内效果评价 | 第63-74页 |
| 4.1 引言 | 第63页 |
| 4.2 实验材料和仪器 | 第63-65页 |
| 4.2.1 实验材料和试剂 | 第63-64页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第64页 |
| 4.2.3 实验用细胞系 | 第64-65页 |
| 4.2.4 工作溶液 | 第65页 |
| 4.3 实验方法 | 第65-68页 |
| 4.3.1 Polyplex的制备 | 第65页 |
| 4.3.2 γ-PGA(polyplex)的制备 | 第65页 |
| 4.3.3 复合物的粒径和电势测定 | 第65-66页 |
| 4.3.4 纳米复合物细胞水平的转染实验(荧光素酶基因的转染实验) | 第66页 |
| 4.3.5 小鼠胰腺癌原位瘤模型的建立 | 第66-68页 |
| 4.3.6 y-PGA (BPEI/TRAIL)纳米复合物的体内抑瘤实验 | 第68页 |
| 4.3.7 肿瘤组织病理切片 | 第68页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第68-73页 |
| 4.4.1 纳米复合物的粒径和电势 | 第68-69页 |
| 4.4.2 纳米复合物的转染实验 | 第69-70页 |
| 4.4.3 γ-PGA(BPEI/TRAIL)纳米复合物体内抑瘤实验 | 第70-73页 |
| 4.4.3.1 肿瘤部位生物发光曲线 | 第70页 |
| 4.4.3.2 裸鼠体重变化曲线 | 第70-71页 |
| 4.4.3.3 不同组别的活体成像图 | 第71-72页 |
| 4.4.3.4 解剖得到的肿瘤组织样本 | 第72页 |
| 4.4.3.5 肿瘤组织的病理切片 | 第72-73页 |
| 4.5 本章小结 | 第73-74页 |
| 第五章 结论与展望 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 作者简历及在校期间所取得的科研成果 | 第82页 |
