| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-24页 |
| 1.1 文献综述 | 第9-23页 |
| 1.1.1 镉的来源及污染状况 | 第9页 |
| 1.1.2 镉污染对动植物的危害 | 第9-10页 |
| 1.1.3 水稻对镉的吸收及运输 | 第10-13页 |
| 1.1.4 水稻的耐镉机制 | 第13-15页 |
| 1.1.5 水稻中与镉运输相关基因的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.1.6 镉相关转运蛋白的分子结构及镉运输的分子机理 | 第17-19页 |
| 1.1.7 FWL基因的相关研究 | 第19-23页 |
| 1.2 研究问题的由来 | 第23页 |
| 1.3 研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-38页 |
| 2.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.2 菌株与载体 | 第24页 |
| 2.3 常用试剂与实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.4 CTAB法提取植物DNA | 第25页 |
| 2.5 植物总RNA的提取(TRIZOL法)和反转录 | 第25-27页 |
| 2.5.1 植物总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.5.2 反转录 | 第26-27页 |
| 2.6 OsFWL4基因的定点突变 | 第27-28页 |
| 2.7 酵母ycf1菌株异源表达OsFWL相关基因探索其重要功能域 | 第28-30页 |
| 2.7.1 相关载体构建 | 第28页 |
| 2.7.2 酵母转化 | 第28-29页 |
| 2.7.3 酵母培养及抗镉分析 | 第29-30页 |
| 2.8 酵母双杂交筛库钓取OsFWL4的互作蛋白 | 第30-32页 |
| 2.8.1 酵母双杂交原理 | 第30-31页 |
| 2.8.2 酵母双杂交的载体构建 | 第31页 |
| 2.8.3 酵母双杂交筛库 | 第31-32页 |
| 2.8.4 酵母双杂交点对点验证蛋白互作 | 第32页 |
| 2.9 双分子荧光互补(BiFC)验证蛋白互作 | 第32-35页 |
| 2.9.1 双分子荧光互补(BiFC)原理 | 第32-33页 |
| 2.9.2 双分子荧光互补(BiFC)载体构建 | 第33-34页 |
| 2.9.3 水稻原生质体转化 | 第34-35页 |
| 2.10 OsFWL4转化拟南芥探索其抗镉作用 | 第35-38页 |
| 2.10.1 拟南芥的遗传转化及阳性筛选 | 第35-36页 |
| 2.10.2 拟南芥叶片蛋白提取 | 第36页 |
| 2.10.3 SDS-PAGE及Western Blot检测 | 第36-37页 |
| 2.10.4 拟南芥阳性苗的镉处理 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-48页 |
| 3.1 OsFWL4介导镉抗性 | 第38-43页 |
| 3.1.1 酵母异源表达OsFWL4及其截短片段的生长特点 | 第38-39页 |
| 3.1.2 OsFWL4中CCXXG结构域对其镉抗性的作用 | 第39-40页 |
| 3.1.3 OsFWL4的疑似磷酸化位点对其镉抗性不重要 | 第40-41页 |
| 3.1.4 OsFWL4在拟南芥中超表达能增加植株的镉敏感性 | 第41-43页 |
| 3.2 OsFWL4与OsRbCS能够相互作用 | 第43-45页 |
| 3.2.1 酵母双杂交筛库钓取OsFWL4的互作蛋白 | 第43页 |
| 3.2.2 酵母双杂交验证OsFWL4能与OsRbCS相互作用 | 第43-44页 |
| 3.2.3 BiFC验证OsFWL4能与OsRbCS相互作用 | 第44-45页 |
| 3.3 OsFWL2介导镉抗性 | 第45-48页 |
| 3.3.1 OsFWL2蛋白二级结构的预测 | 第45页 |
| 3.3.2 PCR方法获取OsFWL2蛋白的截短片段 | 第45-46页 |
| 3.3.3 酵母异源表达证明OsFWL2跨膜结构域对抗镉重要 | 第46-48页 |
| 4 讨论 | 第48-52页 |
| 参考文献 | 第52-65页 |
| 附录 | 第65-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
