| 名词简写 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 综述 | 第11-16页 |
| 1.1 重组工程 | 第11-13页 |
| 1.1.1 重组工程简介 | 第11-12页 |
| 1.1.2 同源重组介导的染色体基因的修饰 | 第12-13页 |
| 1.2 麦芽糖结合蛋白的介绍和应用 | 第13-14页 |
| 1.3 TEV蛋白酶的介绍和应用 | 第14-15页 |
| 1.4 研究意义和内容 | 第15-16页 |
| 1.4.1 意义 | 第15页 |
| 1.4.2 内容 | 第15-16页 |
| 第2章 TEV蛋白酶表达工程菌的构建 | 第16-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 所用的菌种和质粒以及所构建的菌种和质粒 | 第17页 |
| 2.1.2 引物合成与测序 | 第17-18页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第18页 |
| 2.1.4 主要试剂及溶液 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-24页 |
| 2.2.1 常规分子生物学操作方法 | 第19-21页 |
| 2.2.2 用于表达重组酶的质粒 | 第21-22页 |
| 2.2.3 用于重组HA-MBP-TEV-Cm-HA的相关克隆的构建 | 第22页 |
| 2.2.4 突变菌株的构建 | 第22-23页 |
| 2.2.5 菌株的表达和纯化 | 第23-24页 |
| 2.3 实验结果 | 第24-27页 |
| 2.3.1 重组克隆HA-MBP-TEV-Cm-HA的构建 | 第24-25页 |
| 2.3.2 突变菌株基因型的验证 | 第25页 |
| 2.3.3 融合蛋白的表达 | 第25-26页 |
| 2.3.4 融合蛋白的纯化 | 第26-27页 |
| 2.4 讨论 | 第27-28页 |
| 第3章 TEV蛋白酶细胞内自剪切体系的构建 | 第28-41页 |
| 3.1 实验材料 | 第29-31页 |
| 3.1.1 所用的菌种和质粒以及所构建的菌种和质粒 | 第29-30页 |
| 3.1.2 引物合成与测序 | 第30页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第30页 |
| 3.1.4 主要试剂及溶液 | 第30-31页 |
| 3.2 实验方法 | 第31-34页 |
| 3.2.1 常规分子生物学操作方法 | 第31页 |
| 3.2.2 I-SceI实现基因无痕敲除的方法 | 第31页 |
| 3.2.3 用于检测研究中所得的细胞内剪切系统克隆的构建 | 第31-32页 |
| 3.2.4 Red电转感受态细胞的制备和DNA转化 | 第32-33页 |
| 3.2.5 菌株的表达 | 第33-34页 |
| 3.3 实验结果 | 第34-40页 |
| 3.3.1 用于检测研究中所得的细胞内剪切克隆的构建结果 | 第34-36页 |
| 3.3.2 重组菌株基因型的验证 | 第36-38页 |
| 3.3.3 LS2408和LS2412的表达结果 | 第38-39页 |
| 3.3.4 自剪切体系的表达 | 第39-40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-41页 |
| 第4章 TEV蛋白酶细胞内自剪切体系的重新构建 | 第41-54页 |
| 4.1 实验材料 | 第41-43页 |
| 4.1.1 所用的菌种和质粒以及所构建的菌种和质粒 | 第41-42页 |
| 4.1.2 引物合成与测序 | 第42页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第42页 |
| 4.1.4 主要试剂及溶液 | 第42-43页 |
| 4.2 实验方法 | 第43-45页 |
| 4.2.1 常规分子生物学操作方法 | 第43页 |
| 4.2.2 用于重组HA-MBP-TEV-Cm-HA和HA-TEV-Gm的相关克隆的构建 | 第43页 |
| 4.2.3 Red电转感受态细胞的制备和DNA转化 | 第43-44页 |
| 4.2.4 菌株的表达 | 第44-45页 |
| 4.2.5 自剪切系统的优化 | 第45页 |
| 4.3 实验结果 | 第45-53页 |
| 4.3.1 重组克隆HA-MBP-TEV-Gm-HA和HA-TEV-Gm的构建 | 第45-46页 |
| 4.3.2 突变菌株基因型的验证 | 第46-48页 |
| 4.3.3 融合蛋白的表达 | 第48-49页 |
| 4.3.4 细胞内自剪切体系的表达 | 第49-50页 |
| 4.3.5 自剪切体系的优化 | 第50-53页 |
| 4.4 讨论 | 第53-54页 |
| 总结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 在读期间发表的学术论文及专利 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
