| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 引言 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-22页 |
| 1.1 糖基化修饰概述 | 第9-14页 |
| 1.1.1 糖基化修饰类型 | 第9-11页 |
| 1.1.2 O-GalNAc糖基化功能 | 第11-12页 |
| 1.1.3 ppGalNAc-Ts家族 | 第12-14页 |
| 1.2 FoxA1概述 | 第14-17页 |
| 1.2.1 FoxA1基因与结构 | 第15页 |
| 1.2.2 FoxA1的功能 | 第15-16页 |
| 1.2.3 FoxA1与乳腺癌 | 第16页 |
| 1.2.4 FoxA1的糖基化 | 第16-17页 |
| 1.3 O-GalNAc糖基化研究的技术和方法 | 第17-21页 |
| 1.3.1 凝集素检测 | 第18页 |
| 1.3.2 SimpleCells策略 | 第18-19页 |
| 1.3.3 O-糖基化位点的质谱分析 | 第19-21页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第21-22页 |
| 2 人FoxA1蛋白的原核表达及纯化 | 第22-42页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-24页 |
| 2.2.1 菌株、载体 | 第22页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.2.3 实验试剂 | 第23页 |
| 2.2.4 主要溶液 | 第23-24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-33页 |
| 2.3.1 表达载体pET28a(+)-FoxA1的构建 | 第24-28页 |
| 2.3.2 FoxA1的密码子优化 | 第28页 |
| 2.3.3 FoxA1重组蛋白的的表达 | 第28-30页 |
| 2.3.4 FoxA1重组蛋白表达条件的优化 | 第30-31页 |
| 2.3.5 表达载体pET28a(+)-FoxA1-a，b和c的构建 | 第31-32页 |
| 2.3.6 FoxA1-a，b和c重组蛋白的表达及纯化 | 第32-33页 |
| 2.4 实验结果 | 第33-40页 |
| 2.4.1 表达载体pET28a(+)-FoxA1的构建 | 第33-34页 |
| 2.4.2 FoxA1的密码子优化 | 第34-35页 |
| 2.4.3 表达载体pET28a(+)-Op-FoxA1的构建 | 第35-36页 |
| 2.4.4 FoxA1蛋白的表达及条件优化 | 第36-37页 |
| 2.4.5 表达载体pET28a(+)-FoxA1-a，b和c的构建 | 第37-39页 |
| 2.4.6 FoxA1-a，b和c重组蛋白的表达、纯化及SDS-PAGE电泳分析 | 第39-40页 |
| 2.5 讨论 | 第40-41页 |
| 2.6 小结 | 第41-42页 |
| 3 人ppGalNAc-T2重组蛋白的表达、纯化及酶活测定 | 第42-51页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 实验材料 | 第42-44页 |
| 3.2.1 细胞、菌株和载体 | 第42页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第42-43页 |
| 3.2.3 实验试剂 | 第43页 |
| 3.2.4 主要溶液 | 第43-44页 |
| 3.3 实验方法 | 第44-48页 |
| 3.3.1 无内毒素质粒pFLAG-CMV3T2的提取 | 第44-45页 |
| 3.3.2 293T细胞的培养 | 第45页 |
| 3.3.3 pFLAG-CMV3T2转染 293T细胞 | 第45页 |
| 3.3.4 ppGalNAc-T2重组蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| 3.3.5 BCA法蛋白定量 | 第46页 |
| 3.3.6 SDS-PAGE银染分析 | 第46-47页 |
| 3.3.7 Western Blot分析 | 第47页 |
| 3.3.8 ppGalNAc-T2重组蛋白的酶活性检测 | 第47-48页 |
| 3.4 实验结果 | 第48-49页 |
| 3.4.1 ppGalNAc-T2的表达和纯化 | 第48页 |
| 3.4.2 ppGalNAc-T2重组蛋白的酶活性检测 | 第48-49页 |
| 3.5 讨论 | 第49-50页 |
| 3.6 小结 | 第50-51页 |
| 4 ppGalNAc-T2催化FoxA1-a，b和c的反应及检测 | 第51-66页 |
| 4.1 引言 | 第51页 |
| 4.2 实验材料 | 第51-52页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第51-52页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第52页 |
| 4.2.3 主要溶剂 | 第52页 |
| 4.3 实验方法 | 第52-54页 |
| 4.3.1 FoxA1蛋白的酶活位点预测 | 第52-53页 |
| 4.3.2 ppGalNAc-T2催化FoxA1-a，b和c的反应 | 第53页 |
| 4.3.3 凝集素检测 | 第53页 |
| 4.3.4 质谱分析 | 第53-54页 |
| 4.3.5 FoxA1蛋白的结构预测及与ppGalNAc-T2的分子对接 | 第54页 |
| 4.3.6 ppGalNAc-T2催化短肽的反应及色谱、质谱分析 | 第54页 |
| 4.4 实验结果 | 第54-63页 |
| 4.4.1 FoxA1蛋白的O-GalNAc糖基化位点预测 | 第54-55页 |
| 4.4.2 ppGalNAc-T2催化FoxA1-a，b和c反应后的凝集素检测 | 第55页 |
| 4.4.3 ppGalNAc-T2催化FoxA1-c反应后的质谱分析 | 第55-57页 |
| 4.4.5 FoxA1蛋白的结构预测及与ppGalNAc-T2的分子对接 | 第57-59页 |
| 4.4.6 ppGalNAc-T2催化FoxA1-1，2 和3反应及色谱、质谱分析 | 第59-61页 |
| 4.4.7 ppGalNAc-T2催化FoxA1-1 突变肽反应后的质谱分析 | 第61-63页 |
| 4.5 讨论 | 第63-64页 |
| 4.6 小结 | 第64-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 附录A pET-28a(+)质粒图谱 | 第67-68页 |
| 附录B FoxA1优化后的基因序列 | 第68-69页 |
| 附录C 人FoxA1的O-GalNAc糖基化位点预测 | 第69-70页 |
| 附录D FoxA1-c胰蛋白酶酶解后肽段的质荷比 | 第70-71页 |
| 附录E FoxA1结构预测 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-79页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
