| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 第一部分 文献综述及实验设计 | 第13-25页 |
| 第一章 不均一核糖核蛋白研究进展 | 第14-23页 |
| 引言 | 第14-15页 |
| 1 hnRNPs 家族 | 第15-16页 |
| ·hnRNPs 家族概述 | 第15页 |
| ·hnRNPs 家族成员结构特征及与RNA 的作用方式 | 第15-16页 |
| ·hnRNPs 的结构特征 | 第15-16页 |
| ·hnRNPs 与RNA 的作用方式 | 第16页 |
| 2 hnRNPs 家族的生物学功能 | 第16-19页 |
| ·hnRNP A1 的生物学功能 | 第16-17页 |
| ·hnRNP K 的生物学功能 | 第17-18页 |
| ·hnRNP Q 的生物学功能 | 第18页 |
| ·hnRNP U 的生物学功能 | 第18-19页 |
| ·其他hnRNPs 的生物学功能 | 第19页 |
| 3 hnRNPs 家族与疾病的关系 | 第19-22页 |
| ·hnRNPs 与丙型肝炎病毒(HCV)的关系 | 第19-20页 |
| ·hnRNPs 与人类免疫缺陷病毒(HIV)的关系 | 第20页 |
| ·hnRNPs 与脊髓灰质炎病毒的关系 | 第20-21页 |
| ·hnRNPs 与SARS 病毒的关系 | 第21页 |
| ·hnRNPs 与肿瘤疾病的关系 | 第21-22页 |
| ·hnRNPs 与自身免疫性疾病的关系 | 第22页 |
| 4 hnRNPs 家族研究展望 | 第22-23页 |
| 第二章 实验设计方案 | 第23-25页 |
| 1 研究目的和意义 | 第23页 |
| 2 研究内容 | 第23-24页 |
| 3 实验流程图 | 第24-25页 |
| 第二部分 研究论文 | 第25-80页 |
| 第一章 生物信息学分析 | 第26-35页 |
| 1 生物信息学工具 | 第26页 |
| 2 方法 | 第26-27页 |
| 3 结果 | 第27-33页 |
| ·Bmsqd-1 的序列分析 | 第27-28页 |
| ·家蚕Bmsqd-1 基因推测的氨基酸序列的生物信息学分析 | 第28-29页 |
| ·家蚕Bmsqd-1 基因推测的氨基酸序列同源性分析及进化树的构建 | 第29-30页 |
| ·BmSQD-1 的蛋白质特性及功能分析 | 第30-31页 |
| ·BmSQD-1 的二级结构分析 | 第31页 |
| ·BmSQD-1 的三级结构分析 | 第31-32页 |
| ·BmSQD-1 在细胞中定位的分析 | 第32页 |
| ·电子表达谱分析 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| 第二章 Bm SQD-1 蛋白的原核表达 | 第35-48页 |
| 1 材料与试剂 | 第35-39页 |
| ·材料 | 第35页 |
| ·试剂 | 第35页 |
| ·自配试剂 | 第35-39页 |
| ·培养基 | 第35-36页 |
| ·抗生素 | 第36页 |
| ·碱裂解法小量制备质粒DNA 用溶液 | 第36-37页 |
| ·核酸电泳所用溶液 | 第37页 |
| ·蛋白电泳所用溶液 | 第37-38页 |
| ·其他溶液 | 第38-39页 |
| 2 方法 | 第39-45页 |
| ·Bmsqd-1 基因的克隆 | 第39-43页 |
| ·特异性引物的设计与合成 | 第39页 |
| ·PCR 扩增 | 第39-40页 |
| ·碱裂解法少量快速抽提质粒DNA | 第40页 |
| ·凝胶回收，纯化PCR 产物 | 第40-41页 |
| ·目的片段与pET-28a(+)载体双酶切与回收 | 第41-42页 |
| ·连接反应 | 第42页 |
| ·E.coli 感受态细胞的制备 | 第42页 |
| ·连接产物的转化 | 第42-43页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-Bmsqd-1 的筛选与鉴定 | 第43页 |
| ·BmSQD-1 蛋白的表达 | 第43-45页 |
| ·CaC1_2 法制备E.coli BL21(DE3)感受态细胞 | 第43-44页 |
| ·重组质粒pET-28a-Bmsqd-1 的筛选与鉴定 | 第44页 |
| ·融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第44页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第44-45页 |
| 3 结果 | 第45-46页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第45页 |
| ·重组质粒pET-28a(+)-Bmsqd-1 的鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组质粒pET-28(+)-Bmsqd-1 的测定 | 第46页 |
| ·重组蛋白BmSQD-1 的诱导表达 | 第46页 |
| 4. 讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 重组蛋白的纯化及多克隆抗体的制备 | 第48-60页 |
| 1. 材料与试剂 | 第48-51页 |
| ·材料 | 第48页 |
| ·订购试剂 | 第48页 |
| ·自配试剂 | 第48-51页 |
| ·镍柱亲和层析纯化用试剂 | 第48-49页 |
| ·反相FPLC 纯化用试剂 | 第49页 |
| ·SDS-PAGE 用试剂 | 第49页 |
| ·Bradford 检测用试剂 | 第49页 |
| ·抗体制备用试剂 | 第49-50页 |
| ·ELISA 用溶液 | 第50页 |
| ·抗体纯化用试剂 | 第50-51页 |
| ·Western blotting 用溶液 | 第51页 |
| 2. 方法 | 第51-56页 |
| ·重组蛋白His-BmSQD-1 的纯化 | 第51-53页 |
| ·重组蛋白的少量表达分析 | 第51-52页 |
| ·大量重组蛋白的表达和融合蛋白的亲和层析 | 第52页 |
| ·Bradford 法检测蛋白浓度 | 第52页 |
| ·融合蛋白的FPLC 纯化 | 第52-53页 |
| ·融合蛋白分子量的质谱鉴定 | 第53页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第53-56页 |
| ·抗原的制备 | 第53页 |
| ·免疫新西兰大白兔 | 第53-54页 |
| ·多克隆抗血清的制备 | 第54页 |
| ·抗体的纯化 | 第54页 |
| ·间接ELISA 方法测定抗体效价 | 第54-55页 |
| ·Western blotting 检测抗体特异性 | 第55-56页 |
| 3. 结果 | 第56-59页 |
| ·His-BmSQD-1 融合蛋白表达形式的确定及蛋白纯化 | 第56页 |
| ·FPLC 分离纯化 | 第56-57页 |
| ·质谱分析 | 第57页 |
| ·抗BmSQD-1 多克隆抗体的纯化 | 第57-58页 |
| ·抗BmSQD-1 多克隆抗体效价的测定 | 第58页 |
| ·Western blotting 检测抗体的特异性 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-60页 |
| 第四章 家蚕Bm SQD-1 蛋白在家蚕体内的表达分析 | 第60-77页 |
| 1 材料与试剂 | 第60-61页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·试剂 | 第60页 |
| ·试剂配制 | 第60-61页 |
| 2 方法 | 第61-65页 |
| ·ELISA 半定量法检测BmSQD-1 蛋白在蚕蛹总蛋白中的含量 | 第61页 |
| ·Western blotting 检测BmSQD-1 蛋白表达量 | 第61-62页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第61页 |
| ·Western blotting | 第61-62页 |
| ·RT-PCR 和荧光定量PCR | 第62-65页 |
| ·家蚕各组织中总RNA 的提取 | 第62-63页 |
| ·用RNase-Free DNase 消化总RNA 中残留的基因组DNA | 第63页 |
| ·荧光定量PCR 的引物设计 | 第63-64页 |
| ·荧光定量PCR | 第64-65页 |
| ·荧光定量PCR 数据分析 | 第65页 |
| 3 结果 | 第65-76页 |
| ·ELISA 半定量结果 | 第65-68页 |
| ·制作ELISA 标准曲线 | 第65-66页 |
| ·测定蚕蛹总蛋白中BmSQD-1 含量的测定 | 第66-68页 |
| ·BmSQD-1 蛋白的Western blotting 检测 | 第68-69页 |
| ·Western blotting 检测BmSQD-1 蛋白在家蚕组织中的分布 | 第68-69页 |
| ·Western blotting 检测BmSQD-1 蛋白在家蚕各时期表达量 | 第69页 |
| ·荧光定量PCR 结果 | 第69-76页 |
| ·家蚕五龄幼虫各组织及时期总RNA 浓度测定 | 第69-70页 |
| ·家蚕各时期发育过程中Bmsqd-1 基因转录水平的变化 | 第70-72页 |
| ·五龄幼虫各组织中Bmsqd-1 基因转录水平的检测 | 第72-76页 |
| 4. 讨论 | 第76-77页 |
| 第五章 亚细胞定位 | 第77-80页 |
| 1 试剂与材料 | 第77页 |
| ·材料与设备 | 第77页 |
| ·试剂 | 第77页 |
| 2 方法 | 第77-78页 |
| 3 结果 | 第78页 |
| 4 讨论 | 第78-80页 |
| 结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
