| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-12页 |
| 缩略语 | 第12-13页 |
| 第一章 小热休克蛋白的综述 | 第13-20页 |
| 引言 | 第13页 |
| 1 热休克蛋白的发现与命名 | 第13-14页 |
| 2 小热休克蛋白的结构及作用机理 | 第14-16页 |
| 3 小热休克蛋白的生物学作用 | 第16-18页 |
| ·分子伴侣功能 | 第16页 |
| ·使生物获得耐热性 | 第16-17页 |
| ·与细胞凋亡相关 | 第17页 |
| ·免疫学功能 | 第17页 |
| ·稳定细胞骨架 | 第17-18页 |
| ·参与调节细胞的生长和分化 | 第18页 |
| 4 与疾病的关系 | 第18页 |
| 5 展望 | 第18-20页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第20-22页 |
| 1 研究目的和意义 | 第20页 |
| 2 研究内容 | 第20-21页 |
| 3 实验流程图 | 第21-22页 |
| ·原核表达及分布情况 | 第21-22页 |
| 第三章 序列分析 | 第22-30页 |
| 1 生物信息学工具 | 第22页 |
| 2 方法 | 第22-23页 |
| ·BmHSP22.6 基因的获得 | 第22页 |
| ·BmHSP22.6 基因的序列分析 | 第22-23页 |
| 3 结果 | 第23-29页 |
| ·BmHSP22.6 基因的序列 | 第23页 |
| ·BmHSP22.6 蛋白氨基酸序列同源性分析 | 第23-24页 |
| ·BmHSP22.6 蛋白疏水性分析 | 第24-25页 |
| ·BmHSP22.6 蛋白二级结构的预测 | 第25页 |
| ·BmHSP22.6 蛋白高级结构的预测 | 第25-26页 |
| ·BmHSP22.6 蛋白定位的预测 | 第26页 |
| ·BmHSP22.6 蛋白的信号肽分析 | 第26-27页 |
| ·BmHSP22.6 蛋白磷酸化位点预测 | 第27页 |
| ·BmHSP22.6 蛋白进化树的构建 | 第27-28页 |
| ·BmHSP22.6 蛋白电子表达谱分析 | 第28-29页 |
| 4 讨论 | 第29-30页 |
| 第四章 家蚕BmHSP22.6 基因的克隆、表达与纯化 | 第30-42页 |
| 1 材料与试剂 | 第30-33页 |
| ·材料 | 第30页 |
| ·试剂与仪器 | 第30页 |
| ·试剂的配制 | 第30-33页 |
| 2 方法 | 第33-38页 |
| ·引物的设计 | 第33页 |
| ·质粒提取 | 第33页 |
| ·PCR 扩增 | 第33页 |
| ·PCR 产物的纯化 | 第33-34页 |
| ·双酶切PCR 产物与表达载体pET-28a 并回收 | 第34页 |
| ·连接反应 | 第34页 |
| ·感受态细胞的制备(CaCl_2 法) | 第34-35页 |
| ·连接产物的转化 | 第35页 |
| ·重组克隆的筛选与鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组质粒转化E.coli BL21 Star (DE3) | 第36页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中表达 | 第36页 |
| ·SDS-PAGE 电泳分析 | 第36-37页 |
| ·融合蛋白的亲和层析 | 第37页 |
| ·融合蛋白的FPLC 纯化 | 第37页 |
| ·融合蛋白分子量的质谱鉴定 | 第37-38页 |
| 3 结果 | 第38-41页 |
| ·PCR 扩增目的片段 | 第38页 |
| ·重组质粒的PCR 扩增和双酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·测序 | 第39页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第39页 |
| ·融合蛋白的亲和层析 | 第39-40页 |
| ·FPLC 分离纯化 | 第40-41页 |
| ·融合蛋白分子量的质谱鉴定 | 第41页 |
| 4 讨论 | 第41-42页 |
| 第五章 多克隆抗体的制备与鉴定 | 第42-49页 |
| 1 材料与试剂 | 第42-44页 |
| ·材料 | 第42页 |
| ·试剂与仪器 | 第42页 |
| ·试剂的配制 | 第42-44页 |
| 2 方法 | 第44-46页 |
| ·测蛋白含量 | 第44页 |
| ·制备抗原 | 第44页 |
| ·免疫动物 | 第44页 |
| ·多克隆抗血清制备 | 第44页 |
| ·抗体的纯化 | 第44-45页 |
| ·ELISA 测定抗血清效价 | 第45页 |
| ·Western blot 检测抗体特异性 | 第45-46页 |
| 3 结果 | 第46-48页 |
| ·纯化蛋白定量 | 第46页 |
| ·多克隆抗体的纯化 | 第46-47页 |
| ·抗体效价测定 | 第47页 |
| ·Western blot 检测 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| 第六章 热激实验 | 第49-60页 |
| 1 材料与试剂 | 第49-51页 |
| ·材料 | 第49页 |
| ·试剂 | 第49页 |
| ·试剂的配制 | 第49-51页 |
| 2 方法 | 第51-53页 |
| ·Western blot 样品的获得 | 第51页 |
| ·Western blot 检测BmHSP22.6 蛋白的分布 | 第51-52页 |
| ·热激实验 | 第52页 |
| ·间接免疫荧光实验 | 第52-53页 |
| 3 结果 | 第53-58页 |
| ·Western blot 分析家蚕五龄幼虫各组织中BmHSP22.6 的分布 | 第53页 |
| ·Western blot 分析家蚕发育过程中BmHSP22.6 蛋白表达量的变化 | 第53页 |
| ·ELISA 半定量标准曲线 | 第53-54页 |
| ·热激处理后头和皮中BmHSP22.6 的表达变化情况 | 第54-55页 |
| ·吐丝期幼虫和蛹热激处理后的表达水平 | 第55-56页 |
| ·吐丝期幼虫和蛹热激处理后的表达变化情况 | 第56-57页 |
| ·间接免疫荧光实验 | 第57-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 第七章 功能初步研究 | 第60-64页 |
| 1 材料与试剂 | 第60页 |
| ·材料 | 第60页 |
| ·试剂与设备 | 第60页 |
| 2 方法 | 第60页 |
| ·分子伴侣活性测定 | 第60页 |
| 3 结果 | 第60-62页 |
| ·分子伴侣活性测定结果 | 第60-62页 |
| 4 讨论 | 第62-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
