| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 引言 | 第8-9页 |
| 1 绪论 | 第9-21页 |
| 1.1 DNA 复制起始的分子机制 | 第9-10页 |
| 1.2 DNA 复制起始在细胞周期中的调控 | 第10-11页 |
| 1.2.1 复制前染色质状态的建立 | 第11页 |
| 1.2.2 DNA 复制起始的引发 | 第11页 |
| 1.3 酵母自主复制序列 ARS | 第11-16页 |
| 1.3.1 酵母ARS 结构特点 | 第13-14页 |
| 1.3.2 酿酒酵母三号染色体上的ARS | 第14页 |
| 1.3.3 酵母ARS 的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.4 酵母ARS 活性测定方法 | 第16-21页 |
| 1.4.1 复制起始点作图法 | 第16-17页 |
| 1.4.2 单分子分析DNA 复制 | 第17页 |
| 1.4.3 用DNA 芯片分析DNA 复制 | 第17页 |
| 1.4.4 2D 凝胶电泳测定复制起始点活性： | 第17-18页 |
| 1.4.5 realtime PCR 技术分析DNA 复制 | 第18页 |
| 1.4.6 质粒测定法 | 第18-21页 |
| 2. 实验材料和方法 | 第21-34页 |
| 2.1 酿酒酵母YPH 500 基因组DNA 的提取 | 第21-22页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.1.2 主要仪器和设备 | 第21页 |
| 2.1.3 实验方法 | 第21-22页 |
| 2.2 含 ARS304 不同长度侧翼序列的PCR 扩增 | 第22-26页 |
| 2.2.1 引物合成 | 第22-23页 |
| 2.2.2 实验材料 | 第23页 |
| 2.2.3 主要仪器和设备 | 第23页 |
| 2.2.4 实验方法 | 第23-26页 |
| 2.3 PCR 扩增产物的纯化 | 第26页 |
| 2.3.1 实验材料及试剂 | 第26页 |
| 2.3.2 实验仪器及器皿 | 第26页 |
| 2.3.3 实验步骤 | 第26页 |
| 2.4 穿梭质粒pRS405 的小量提取 | 第26-27页 |
| 2.4.1 实验材料及试剂 | 第26-27页 |
| 2.4.2 实验仪器及器皿 | 第27页 |
| 2.4.3 实验步骤 | 第27页 |
| 2.5 重组质粒的构建及鉴定 | 第27-31页 |
| 2.5.1 实验材料及试剂 | 第27-28页 |
| 2.5.2 实验仪器及器皿 | 第28页 |
| 2.5.3 实验步骤 | 第28-31页 |
| 2.6 含ARS 不同侧翼序列自主复制活性的检测 | 第31-34页 |
| 2.6.1 酿酒酵母YPH500 电转化 | 第32-34页 |
| 3. 结果与分析 | 第34-46页 |
| 3.1 酵母基因组的提取结果 | 第34页 |
| 3.2 带有不同长度两侧序列的 ARS304 、ARS 305 PCR 扩增结果 | 第34-35页 |
| 3.3 穿梭载体pRS405 制备结果 | 第35页 |
| 3.4 转化子的鉴定 | 第35-41页 |
| 3.4.1 菌落PCR 鉴定 | 第35-36页 |
| 3.4.2 双酶切鉴定结果 | 第36-38页 |
| 3.4.3 测序结果 | 第38-41页 |
| 3.5 酵母YPH500 生长曲线的测定 | 第41页 |
| 3.6 电转化单因素验证 | 第41-43页 |
| 3.6.1 酵母YPH500 不同的生长状态对电转化效果的影响 | 第41-42页 |
| 3.6.2 外源DNA 量对电转化效果的影响 | 第42-43页 |
| 3.6.3 电场强度对电转化效果的影响 | 第43页 |
| 3.7 均匀设计对转化率条件的优化 | 第43-44页 |
| 3.8 ARS 重组质粒丢失率测定 | 第44-46页 |
| 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-52页 |
| 在学研究成果 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53页 |
