| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 第一章 绪论 | 第19-39页 |
| 1 概述 | 第19-20页 |
| 2 青蒿素类化合物药理作用 | 第20-31页 |
| 2.1 抗疟疾作用 | 第20-21页 |
| 2.2 抗病毒作用 | 第21-22页 |
| 2.3 抗寄生虫作用 | 第22-24页 |
| 2.4 抗真菌 | 第24页 |
| 2.5 抗炎作用 | 第24-27页 |
| 2.6 抗癌活性 | 第27-31页 |
| 3 利用生物技术手段提高青蒿素及青蒿素类物质的产量 | 第31-36页 |
| 3.1 青蒿素类物质的生物转化 | 第31页 |
| 3.2 青蒿素类物质的生物合成 | 第31-33页 |
| 3.3 利用基因工程提高青蒿素产量 | 第33-35页 |
| 3.4 利用细胞工程提高青蒿素的产量 | 第35-36页 |
| 4 本论文研究目的与意义 | 第36-39页 |
| 第二章 黄花蒿再生与遗传转化体系的构建 | 第39-49页 |
| 1 材料与方法 | 第39-42页 |
| 1.1 植物材料 | 第39页 |
| 1.2 农杆菌菌株和质粒 | 第39页 |
| 1.3 酶和试剂 | 第39-40页 |
| 1.4 农杆菌感受态制备及转化 | 第40-41页 |
| 1.5 黄花蒿植株的再生 | 第41页 |
| 1.6 黄花蒿的基因转化 | 第41页 |
| 1.7 转基因黄花蒿GUS活性检测 | 第41页 |
| 1.8 黄花蒿植物组DNA的提取 | 第41-42页 |
| 1.9 转基因植株PCR检测 | 第42页 |
| 2 结果与分析 | 第42-48页 |
| 2.1 农杆菌抑制剂对黄花蒿再生的影响 | 第42-43页 |
| 2.2 黄花蒿对Kan的敏感性 | 第43页 |
| 2.3 预培养对转化效率影响 | 第43页 |
| 2.4 农杆菌的浓度对转化效率的影响 | 第43页 |
| 2.5 乙酰丁香酮(As)对转化效率的影响 | 第43-44页 |
| 2.6 起始材料生长条件对转化效率的影响 | 第44-45页 |
| 2.7 不定芽生根的影响因素 | 第45-46页 |
| 2.8 黄花蒿基因组DNA提取方法的优化 | 第46-47页 |
| 2.9 转基因植株的鉴定 | 第47-48页 |
| 3 小结 | 第48-49页 |
| 第三章 多重突变技术创新黄花蒿种质的研究 | 第49-60页 |
| 1 实验材料与方法 | 第49-51页 |
| 1.1 植物材料和培养条件 | 第49页 |
| 1.2 培养基的组成与配制 | 第49页 |
| 1.3 诱导突变 | 第49-50页 |
| 1.4 新种质的培养与筛选 | 第50-51页 |
| 1.5 新种质的扩繁 | 第51页 |
| 1.6 黄花蒿叶表腺毛密度检测 | 第51页 |
| 1.7 电镜分析 | 第51页 |
| 1.8 统计分析 | 第51页 |
| 2 实验结果 | 第51-57页 |
| 2.1 新的黄花蒿快繁殖技术构建 | 第51-52页 |
| 2.2 易生根突变株的筛选与分析 | 第52-53页 |
| 2.3 野生型和易生根突变株之间形态差异分析 | 第53-55页 |
| 2.4 紧凑型突变株的筛选与分析 | 第55-56页 |
| 2.5 叶茂型突变株的筛选与分析 | 第56页 |
| 2.6 抗白粉病突变株的筛选与分析 | 第56-57页 |
| 3 讨论 | 第57-60页 |
| 第四章 易生根黄花蒿突变株代谢组学分析 | 第60-71页 |
| 1 材料与方法 | 第60-62页 |
| 1.1 实验试剂 | 第60页 |
| 1.2 主要仪器及试剂 | 第60-61页 |
| 1.3 色素含量分析 | 第61页 |
| 1.4 单糖含量分析 | 第61页 |
| 1.5 萜类化合物分析 | 第61-62页 |
| 1.6 单萜对不定根的影响分析 | 第62页 |
| 2 实验结果 | 第62-68页 |
| 2.1 易生根突变株与野生型黄花蒿种色素、糖和多酚等差异分析 | 第62页 |
| 2.2 易生根突变株与野生型黄花蒿中萜类化合物的差异分析 | 第62-65页 |
| 2.3 2-茨醇对黄花蒿不定根形成的影响 | 第65-66页 |
| 2.4 樟脑对黄花蒿不定根形成的影响分析 | 第66-67页 |
| 2.5 突变株与野生型黄花蒿插条切口表面糖含量动态差异分析 | 第67页 |
| 2.6 突变株与野生型黄花蒿插条ROS含量差异分析 | 第67-68页 |
| 3. 讨论 | 第68-71页 |
| 第五章 易生根突变株黄花蒿蛋白组学研究 | 第71-89页 |
| 1 实验材料与方法 | 第71-74页 |
| 1.1 植物材料 | 第71页 |
| 1.2 蛋白提取 | 第71-72页 |
| 1.3 蛋白样品的酶解与iTRAQ标记 | 第72页 |
| 1.4 反相LC-ESI-MS/MS分离条件 | 第72页 |
| 1.5 LTQ-Orbitrap质谱检测条件 | 第72页 |
| 1.6 数据库检索鉴定和iTRAQ定量分析 | 第72-73页 |
| 1.7 半定量RT-PCR分析 | 第73页 |
| 1.8 统计分析 | 第73页 |
| 1.9 引物序列 | 第73-74页 |
| 2 结果 | 第74-85页 |
| 2.1 蛋白提取与蛋白检测 | 第74-75页 |
| 2.2 黄花蒿叶总蛋白鉴定 | 第75-78页 |
| 2.3 差异蛋白分析 | 第78-84页 |
| 2.4 半定量PCR分析 | 第84-85页 |
| 3 讨论 | 第85-89页 |
| 第六章 AaBDH全长cDNA克隆与序列分析 | 第89-101页 |
| 1 材料与方法 | 第89-92页 |
| 1.1 主要仪器 | 第89页 |
| 1.2 主要试剂 | 第89页 |
| 1.3 引物序列 | 第89-90页 |
| 1.4 总RNA提取 | 第90页 |
| 1.5 5'-RACE-Ready cDNA合成 | 第90-91页 |
| 1.6 3'-RACE-Ready cDNA合成 | 第91页 |
| 1.7 5'-RACE PCR反应 | 第91页 |
| 1.8 3'-RACE PCR反应 | 第91页 |
| 1.9 扩增片段纯化 | 第91页 |
| 1.10 5'-RACE和3'-RACE序列的T/A克隆 | 第91页 |
| 1.11 全长拼接 | 第91页 |
| 1.12 序列分析 | 第91-92页 |
| 2 结果与分析 | 第92-100页 |
| 2.1 总RNA提取 | 第92页 |
| 2.2 AaBDH基因全长cDNA克隆 | 第92-93页 |
| 2.3 AaBDH的ORF及其氨基酸序列的预测 | 第93页 |
| 2.4 氨基酸序列的同源性分析 | 第93-94页 |
| 2.5 AaBDH氨基酸组成及理化性质分析 | 第94页 |
| 2.6 AaBDH蛋白亲水/疏水性分析 | 第94-95页 |
| 2.7 AaBDH蛋白信号肽预测 | 第95-96页 |
| 2.8 AaBDH磷酸化位点预测与分析 | 第96页 |
| 2.9 AaBDH蛋白二级结构的预测与分析 | 第96-98页 |
| 2.10 AaBDH蛋白卷曲螺旋结构的预测与分析 | 第98页 |
| 2.11 AaBDH蛋白的跨膜结构预测与分析 | 第98-99页 |
| 2.12 AaBDH蛋白的系统发育树分析 | 第99-100页 |
| 3 小结 | 第100-101页 |
| 第七章 AaBDH基因的功能研究 | 第101-111页 |
| 1 材料与方法 | 第101-105页 |
| 1.1 主要仪器 | 第101页 |
| 1.2 主要试剂 | 第101页 |
| 1.3 引物序列 | 第101-102页 |
| 1.4 cDNA第一链的合成 | 第102页 |
| 1.5 attB PCR反应 | 第102页 |
| 1.6 PCR产物的纯化 | 第102页 |
| 1.7 BP连接反应 | 第102页 |
| 1.8 LR连接反应 | 第102页 |
| 1.9 转化大肠杆菌 | 第102-103页 |
| 1.10 菌落PCR鉴定 | 第103页 |
| 1.11 质粒提取 | 第103页 |
| 1.12 测序 | 第103页 |
| 1.13 转化BL21细胞 | 第103-104页 |
| 1.14 诱导表达 | 第104页 |
| 1.15 蛋白提取与纯化 | 第104页 |
| 1.16 SDS-PAGE分析 | 第104-105页 |
| 1.17 体外酶实验 | 第105页 |
| 1.18 气相色谱条件 | 第105页 |
| 2 结果与分析 | 第105-110页 |
| 2.1 attB PCR产物鉴定与纯化 | 第105-106页 |
| 2.2 中间载体的构建与鉴定 | 第106页 |
| 2.3 表达载体的构建与鉴定 | 第106-107页 |
| 2.4 重组蛋白的诱导表达和纯化 | 第107-108页 |
| 2.5 体外酶试验 | 第108-110页 |
| 3 小结 | 第110-111页 |
| 第八章 黄花蒿中二氢青蒿酸检测方法的建立 | 第111-116页 |
| 1 材料与方法 | 第111-112页 |
| 1.1 实验材料 | 第111页 |
| 1.2 主要仪器及试剂 | 第111页 |
| 1.3 样品处理 | 第111-112页 |
| 1.4 色谱条件 | 第112页 |
| 2 结果与分析 | 第112-115页 |
| 2.1 提取溶剂的选择 | 第112页 |
| 2.2 提取时间的影响 | 第112-113页 |
| 2.3 提取温度的影响 | 第113-114页 |
| 2.4 回收率分析 | 第114页 |
| 2.5 线性关系的考察 | 第114-115页 |
| 2.6 精密度、稳定性、最低检出限和最低定量限的测定 | 第115页 |
| 3 小结 | 第115-116页 |
| 第九章 碱提酸沉法提取青蒿素生产废料中二氢青蒿酸 | 第116-129页 |
| 1 实验材料与仪器 | 第116页 |
| 1.1 实验材料 | 第116页 |
| 1.2 实验仪器试剂 | 第116页 |
| 2 实验方法 | 第116-118页 |
| 2.1 青蒿素生产废料中二氢青蒿酸的检测方法 | 第116-117页 |
| 2.2 碱溶酸沉法提取青蒿素生产废料中的二氢青蒿酸的工艺流程图 | 第117页 |
| 2.3 单因素实验 | 第117-118页 |
| 3 实验结果 | 第118-128页 |
| 3.1 单因素试验结果及分析 | 第118-122页 |
| 3.2 响应面分析法优化工艺 | 第122-128页 |
| 4 结论 | 第128-129页 |
| 第十章 离子交换树脂纯化青蒿素生产废料中二氢青蒿酸 | 第129-138页 |
| 1 实验材料与仪器 | 第129页 |
| 1.1 实验材料 | 第129页 |
| 1.2 实验仪器与试剂 | 第129页 |
| 2 实验方法 | 第129-131页 |
| 2.1 青蒿素生产废料中二氢青蒿酸的检测方法 | 第130页 |
| 2.2 静态吸附解吸试验 | 第130-131页 |
| 2.3 动态吸附洗脱试验 | 第131页 |
| 2.4 最佳工艺条件放大实验 | 第131页 |
| 3 结果与分析 | 第131-136页 |
| 3.1 树脂筛选 | 第131-132页 |
| 3.2 洗脱剂类型的确定 | 第132-133页 |
| 3.3 洗脱剂浓度的确定 | 第133-134页 |
| 3.4 上样量对吸附的影响 | 第134页 |
| 3.5 洗脱液体积对洗脱的影响 | 第134-135页 |
| 3.6 最佳工艺条件放大实验 | 第135-136页 |
| 4 结论 | 第136-138页 |
| 全文结论 | 第138-141页 |
| 本文主要创新点 | 第141-142页 |
| 参考文献 | 第142-162页 |
| 缩略词 | 第162-163页 |
| 致谢 | 第163-164页 |
| 作者简历 | 第164页 |
