| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第1章 引言 | 第13-23页 |
| 1.1 草甘膦及其在农业中的应用和毒副作用 | 第13页 |
| 1.2 草甘膦的检测方法 | 第13-16页 |
| 1.2.1 紫外分光光度法 | 第14页 |
| 1.2.2 高效液相色谱法 | 第14-15页 |
| 1.2.3 气相色谱法 | 第15页 |
| 1.2.4 其他检测方法 | 第15-16页 |
| 1.3 草甘膦的消除方法 | 第16页 |
| 1.4 降解草甘膦的微生物种类及草甘膦降解途径 | 第16-17页 |
| 1.5 草甘膦降解酶 | 第17-20页 |
| 1.5.1 草甘膦氧化还原酶 | 第18页 |
| 1.5.2 甘氨酸氧化酶 | 第18-19页 |
| 1.5.3 草甘膦C-P裂解酶 | 第19页 |
| 1.5.4 草甘膦乙酰转移酶 | 第19-20页 |
| 1.6 降解酶的分离纯化 | 第20-21页 |
| 1.6.1 盐析沉淀法 | 第20-21页 |
| 1.6.2 层析技术的联合使用 | 第21页 |
| 1.6.3 蛋白质电泳技术 | 第21页 |
| 1.7 本课题立项背景及意义 | 第21-22页 |
| 1.8 课题的主要研究内容 | 第22-23页 |
| 第2章 草甘膦测定方法的研究 | 第23-33页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 试验试剂与仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.2.1 试剂 | 第23页 |
| 2.2.2 仪器设备 | 第23-24页 |
| 2.3 试验方法 | 第24-26页 |
| 2.3.1 紫外分光光度法 | 第24-25页 |
| 2.3.2 柱前衍生-高效液相色谱法 | 第25页 |
| 2.3.3 柱后衍生-高效液相色谱法 | 第25-26页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第26-31页 |
| 2.4.1 紫外分光光度法测定草甘膦 | 第26-28页 |
| 2.4.2 柱前衍生-高效液相色谱法测定草甘膦 | 第28-30页 |
| 2.4.3 柱后衍生-高效液相色谱法测定草甘膦 | 第30-31页 |
| 2.5 本章小结 | 第31-33页 |
| 第3章 降解草甘膦米曲霉菌株的紫外诱变选育 | 第33-42页 |
| 3.1 引言 | 第33页 |
| 3.2 试验试剂与仪器设备 | 第33-35页 |
| 3.2.1 菌种来源 | 第33页 |
| 3.2.2 试剂 | 第33页 |
| 3.2.3 培养基 | 第33-34页 |
| 3.2.4 仪器设备 | 第34-35页 |
| 3.3 试验方法 | 第35-37页 |
| 3.3.1 紫外诱变出发菌株的筛选 | 第35-36页 |
| 3.3.2 降解草甘膦米曲霉菌株的紫外诱变选育 | 第36-37页 |
| 3.4 紫外诱变结果讨论 | 第37-41页 |
| 3.4.1 孢子悬浮液浓度的测定 | 第37-38页 |
| 3.4.2 紫外诱变最佳处理时间的确定及杀菌曲线的绘制 | 第38-39页 |
| 3.4.3 正突变优势菌株FUJX 001的筛选 | 第39-41页 |
| 3.5 本章小结 | 第41-42页 |
| 第4章 ASPERGILLUS ORYZAE FUJX 001产草甘膦降解酶发酵条件优化 | 第42-63页 |
| 4.1 引言 | 第42页 |
| 4.2 试验材料 | 第42-43页 |
| 4.2.1 试剂 | 第42页 |
| 4.2.2 培养基 | 第42-43页 |
| 4.2.3 仪器设备 | 第43页 |
| 4.3 试验方法 | 第43-49页 |
| 4.3.1 孢子悬浮液制备 | 第43-44页 |
| 4.3.2 产酶菌株的培养 | 第44页 |
| 4.3.3 粗酶液的提取 | 第44页 |
| 4.3.4 草甘膦降解酶酶活力测定 | 第44-45页 |
| 4.3.5 草甘膦含量测定 | 第45页 |
| 4.3.6 Aspergillus oryzae FUJX 001生物量测定 | 第45页 |
| 4.3.7 Aspergillus oryzae FUJX 001生长曲线及产酶曲线 | 第45页 |
| 4.3.8 草甘膦添加时期对Aspergillus oryzae FUJX 001产草甘膦降解酶活力的影响 | 第45-46页 |
| 4.3.9 外加碳源种类对Aspergillus oryzae FUJX 001产草甘膦降解酶活力的影响 | 第46页 |
| 4.3.10 外加碳源浓度对Aspergillus oryzae FUJX 001产草甘膦降解酶活力的影响 | 第46页 |
| 4.3.11 氮源种类对Aspergillus oryzae FUJX 001产草甘膦降解酶活力的影响 | 第46-47页 |
| 4.3.12 氮源浓度对Aspergillus oryzae FUJX 001产草甘膦降解酶活力的影响 | 第47页 |
| 4.3.13 草甘膦浓度对Aspergillus oryzae FUJX 001产草甘膦降解酶活力的影响 | 第47页 |
| 4.3.14 培养基初始pH对Aspergillus oryzae FUJX 001产草甘膦降解酶活力的影响 | 第47-48页 |
| 4.3.15 摇瓶装液量对Aspergillus oryzae FUJX 001产草甘膦降解酶活力的影响 | 第48页 |
| 4.3.16 培养温度对Aspergillus oryzae FUJX 001产草甘膦降解酶活力的影响 | 第48页 |
| 4.3.17 响应面实验设计 | 第48-49页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第49-61页 |
| 4.4.1 草甘膦降解酶在细胞中的定位 | 第49-50页 |
| 4.4.2 Aspergillus oryzae FUJX 001生长曲线及产酶曲线 | 第50-51页 |
| 4.4.3 草甘膦添加时期对Aspergillus oryzae FUJX 001产草甘膦降解酶活力的影响 | 第51-52页 |
| 4.4.4 外加碳源种类对Aspergillus oryzae FUJX 001产草甘膦降解酶活力的影响 | 第52-53页 |
| 4.4.5 可溶性淀粉浓度对Aspergillus oryzae FUJX 001产草甘膦降解酶活力的影响 | 第53页 |
| 4.4.6 氮源种类对Aspergillus oryzae FUJX 001产草甘膦降解酶活力、的影响 | 第53-54页 |
| 4.4.7 (NH_4)_2SO_4浓度对Aspergillus oryzae FUJX 001产草甘膦降解酶活力的影响 | 第54-55页 |
| 4.4.8 草甘膦浓度对Aspergillus oryzae FUJX 001产草甘膦降解酶活力的影响 | 第55-56页 |
| 4.4.9 培养基初始pH对Aspergillus oryzae FUJX 001产草甘膦降解酶活力的影响 | 第56-57页 |
| 4.4.10 摇瓶装液量对Aspergillus oryzae FUJX 001产草甘膦降解酶活力的影响 | 第57-58页 |
| 4.4.11 培养温度对Aspergillus oryzae FUJX 001产草甘膦降解酶活力的影响 | 第58页 |
| 4.4.12 响应面优化实验结果分析及讨论 | 第58-61页 |
| 4.5 本章小结 | 第61-63页 |
| 第5章 ASPERGILLUS ORYZAE FUJX 001草甘膦降解酶初步分离纯化 | 第63-69页 |
| 5.1 引言 | 第63页 |
| 5.2 试验材料 | 第63-64页 |
| 5.2.1 试剂 | 第63页 |
| 5.2.2 培养基 | 第63页 |
| 5.2.3 仪器设备 | 第63-64页 |
| 5.3 试验方法 | 第64-66页 |
| 5.3.1 草甘膦降解酶粗酶液制备 | 第64页 |
| 5.3.2 酶活力测定 | 第64页 |
| 5.3.3 蛋白质浓度的测定 | 第64-66页 |
| 5.3.4 硫酸铵梯度沉淀 | 第66页 |
| 5.4 结果与分析 | 第66-68页 |
| 5.4.1 梯度沉淀中蛋白质含量及沉淀中草甘膦降解酶活性 | 第66-68页 |
| 5.4.2 初步纯化结果分析 | 第68页 |
| 5.5 本章小结 | 第68-69页 |
| 第6章 ASPERGILLUS ORYZAE FUJX 001草甘膦降解酶酶学性质分析 | 第69-80页 |
| 6.1 引言 | 第69页 |
| 6.2 试验材料 | 第69-70页 |
| 6.2.1 试剂 | 第69页 |
| 6.2.2 培养基 | 第69-70页 |
| 6.2.3 仪器设备 | 第70页 |
| 6.3 试验方法 | 第70-73页 |
| 6.3.1 草甘膦降解酶酶液制备 | 第70-71页 |
| 6.3.2 酶活力测定 | 第71页 |
| 6.3.3 温度对草甘膦降解酶酶促反应的影响 | 第71页 |
| 6.3.4 草甘膦降解酶的热稳定性 | 第71页 |
| 6.3.5 pH对草甘膦降解酶酶促反应的影响 | 第71页 |
| 6.3.6 草甘膦降解酶的pH稳定性 | 第71-72页 |
| 6.3.7 底物浓度对草甘膦降解酶酶促反应的影响 | 第72页 |
| 6.3.8 盐浓度对草甘膦降解酶酶促反应的影响 | 第72页 |
| 6.3.9 金属离子对草甘膦降解酶酶促反应的影响 | 第72页 |
| 6.3.10 表面活性剂和螯合剂对草甘膦降解酶酶促反应的影响 | 第72页 |
| 6.3.11 有机试剂对草甘膦降解酶酶促反应的影响 | 第72-73页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第73-78页 |
| 6.4.1 温度对草甘膦降解酶酶促反应的影响 | 第73页 |
| 6.4.2 草甘膦降解酶的热稳定性 | 第73-74页 |
| 6.4.3 pH对草甘膦降解酶酶促反应的影响 | 第74页 |
| 6.4.4 草甘膦降解酶的pH稳定性 | 第74-75页 |
| 6.4.5 底物浓度对草甘膦降解酶酶促反应的影响 | 第75-76页 |
| 6.4.6 盐浓度对草甘膦降解酶酶促反应的影响 | 第76页 |
| 6.4.7 金属离子对草甘膦降解酶酶促反应的影响 | 第76-77页 |
| 6.4.8 表面活性剂和螯合剂对草甘膦降解酶酶促反应的影响 | 第77-78页 |
| 6.4.9 有机试剂对草甘膦降解酶酶促反应的影响 | 第78页 |
| 6.5 本章小结 | 第78-80页 |
| 第7章 结论与展望 | 第80-82页 |
| 7.1 本文结论 | 第80-81页 |
| 7.2 下步工作方向 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-89页 |
