| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 前言 | 第14-44页 |
| 1.1 呼吸道合胞病毒与疫苗研发 | 第14-30页 |
| 1.1.1 呼吸道合胞病毒的分子生物学 | 第14-22页 |
| 1.1.2 呼吸道合胞病毒的致病性 | 第22页 |
| 1.1.3 抗呼吸道合胞病毒免疫 | 第22-24页 |
| 1.1.4 疫苗增强性疾病 | 第24-26页 |
| 1.1.5 呼吸道合胞病毒疫苗 | 第26-30页 |
| 1.2 杆状病毒载体 | 第30-37页 |
| 1.2.1 杆状病毒 | 第30-32页 |
| 1.2.2 杆状病毒转导哺乳动物细胞的机制 | 第32-33页 |
| 1.2.3 杆状病毒诱导的先天免疫反应 | 第33-35页 |
| 1.2.4 杆状病毒疫苗载体 | 第35-37页 |
| 1.3 先天免疫信号分子与免疫佐剂 | 第37-42页 |
| 1.3.1 抗病毒先天免疫 | 第37-40页 |
| 1.3.2 病毒诱导的信号接头蛋白 | 第40-41页 |
| 1.3.3 先天免疫信号分子免疫佐剂 | 第41-42页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第42-44页 |
| 第二章 材料与方法 | 第44-68页 |
| 2.1 实验仪器 | 第44页 |
| 2.2 实验材料 | 第44-50页 |
| 2.2.1 病毒、菌株、质粒、工具酶及试剂 | 第44-45页 |
| 2.2.2 培养基及溶液的配制 | 第45-49页 |
| 2.2.3 实验动物 | 第49-50页 |
| 2.3 分子克隆实验方法 | 第50-55页 |
| 2.3.1 RSV的扩增 | 第50页 |
| 2.3.2 RSV RNA的提取及RT-PCR扩增目的基因 | 第50-52页 |
| 2.3.3 DNA片段的回收 | 第52页 |
| 2.3.4 氯化钙法制备感受态细胞 | 第52-53页 |
| 2.3.5 质粒DNA的转化 | 第53页 |
| 2.3.6 质粒DNA的提取 | 第53-54页 |
| 2.3.7 表达RSV F1蛋白重组质粒pET-28a-F1的构建 | 第54页 |
| 2.3.8 杆状病毒表达系统重组转移质粒的构建 | 第54-55页 |
| 2.4 蛋白质表达与鉴定 | 第55-58页 |
| 2.4.1 重组F1蛋白的诱导表达 | 第55-56页 |
| 2.4.2 SDS-PAGE | 第56页 |
| 2.4.3 Western Blot | 第56-57页 |
| 2.4.4 重组蛋白的纯化 | 第57页 |
| 2.4.5 蛋白质浓度测定 | 第57-58页 |
| 2.4.6 间接免疫荧光试验 | 第58页 |
| 2.5 杆状病毒的构建与鉴定 | 第58-63页 |
| 2.5.1 重组杆状病毒的构建 | 第58-61页 |
| 2.5.2 重组杆状病毒转导哺乳动物细胞 | 第61页 |
| 2.5.3 荧光素酶报告试验 | 第61-62页 |
| 2.5.4 重组杆状病毒的增殖和纯化 | 第62页 |
| 2.5.5 免疫电镜 | 第62-63页 |
| 2.6 动物免疫 | 第63页 |
| 2.6.1 家兔免疫 | 第63页 |
| 2.6.2 小鼠免疫接种和攻毒感染 | 第63页 |
| 2.7 免疫检测 | 第63-68页 |
| 2.7.1 抗体滴度的酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第63-64页 |
| 2.7.2 中和抗体的空斑减数试验(Plaque reduction assay) | 第64页 |
| 2.7.3 小鼠脾脏淋巴细胞分离和体外培养 | 第64-65页 |
| 2.7.4 细胞因子的ELISA检测 | 第65-66页 |
| 2.7.5 小鼠肺组织切片HE染色及病理学检测 | 第66-68页 |
| 第三章 RSV F1蛋白的表达纯化及多克隆抗体制备 | 第68-74页 |
| 3.1 实验结果 | 第68-72页 |
| 3.1.1 RSV F1片段的扩增与获得 | 第68-69页 |
| 3.1.2 重组质粒pET-28a-F1的构建和鉴定 | 第69-70页 |
| 3.1.3 F1蛋白的表达、鉴定与纯化 | 第70-71页 |
| 3.1.4 多克隆抗体滴度 | 第71页 |
| 3.1.5 多克隆抗体的特异性 | 第71-72页 |
| 3.2 讨论 | 第72-74页 |
| 第四章 表达呼吸道合胞病毒F蛋白的重组杆状病毒的构建与特性 | 第74-84页 |
| 4.1 实验结果 | 第74-82页 |
| 4.1.1 F基因与tF64融合基因的获得与鉴定 | 第74-75页 |
| 4.1.2 pCMV启动子驱动F基因表达的转移质粒的构建与鉴定 | 第75-77页 |
| 4.1.3 p10启动子驱动tF64融合基因表达的转移质粒的构建与鉴定 | 第77页 |
| 4.1.4 双启动子表达的转移质粒的构建与鉴定 | 第77-78页 |
| 4.1.5 共表达VISA的双启动子表达转移质粒的构建与鉴定 | 第78页 |
| 4.1.6 重组杆状病毒的拯救 | 第78-79页 |
| 4.1.7 目的蛋白在sf9和Vero细胞中的表达与定位 | 第79-82页 |
| 4.1.8 杆状病毒包膜上展示的tF64蛋白 | 第82页 |
| 4.2 讨论 | 第82-84页 |
| 第五章 重组杆状病毒诱导的抗RSV免疫应答 | 第84-94页 |
| 5.1 实验结果 | 第84-91页 |
| 5.1.1 重组杆状病毒诱导特异性体液免疫应答 | 第84-86页 |
| 5.1.2 重组杆状病毒诱导特异性细胞免疫应答 | 第86-87页 |
| 5.1.3 重组杆状病毒免疫诱导针对RSV感染的免疫保护 | 第87-88页 |
| 5.1.4 共表达VISA调节肺组织Th1和Th2类细胞因子的分泌 | 第88-90页 |
| 5.1.5 共表达VISA减轻免疫小鼠RSV感染后的肺部炎症 | 第90-91页 |
| 5.2 讨论 | 第91-94页 |
| 研究总结 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-113页 |
| 致谢 | 第113页 |
