| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-17页 |
| 1.1 梅花鹿的简介 | 第11页 |
| 1.2 鹿茸的发生与再生 | 第11-14页 |
| 1.2.1 鹿茸的发生与再生过程 | 第11-12页 |
| 1.2.2 间充质细胞 | 第12页 |
| 1.2.3 鹿茸间充质细胞 | 第12-13页 |
| 1.2.4 调控鹿茸生长的相关激素和生长因子 | 第13-14页 |
| 1.3 MLT对鹿茸生长调控的研究 | 第14-16页 |
| 1.3.1 MLT及受体的研究进展 | 第14页 |
| 1.3.2 MLT在鹿上的应用 | 第14-16页 |
| 1.4 实验的目的和意义 | 第16-17页 |
| 2 实验材料 | 第17-22页 |
| 2.1 材料 | 第17页 |
| 2.2 实验试剂与耗材 | 第17-19页 |
| 2.3 实验仪器 | 第19-20页 |
| 2.4 实验试剂的配制 | 第20-22页 |
| 3 实验方法 | 第22-38页 |
| 3.1 间充质细胞的分离与培养、冻存和复苏 | 第22-23页 |
| 3.1.1 鹿茸间充质细胞的分离 | 第22页 |
| 3.1.2 鹿茸间充质细胞的培养 | 第22-23页 |
| 3.1.3 鹿茸间充质细胞的冻存与复苏 | 第23页 |
| 3.2 细胞计数 | 第23-24页 |
| 3.3 鹿茸间充质细胞的鉴定 | 第24页 |
| 3.4 梅花鹿MT1基因RNAi重组干扰质粒构建 | 第24-28页 |
| 3.5 重组质粒转染鹿茸间充质细胞 | 第28页 |
| 3.6 转染后鹿茸间充质细胞总RNA提取及检测 | 第28-29页 |
| 3.7 RNA的质量检测 | 第29页 |
| 3.8 RNA的浓度检测 | 第29页 |
| 3.9 RNA的反转录合成 | 第29-30页 |
| 3.10 转染后鹿茸间充质细胞相关基因相对表达量分析 | 第30-32页 |
| 3.10.1 引物设计 | 第30-31页 |
| 3.10.2 qRT-PCR | 第31-32页 |
| 3.11 转染后鹿茸间充质细胞相关蛋白的Western blot分析 | 第32-35页 |
| 3.12 MTT法检测细胞增殖 | 第35页 |
| 3.13 细胞处理后检测细胞周期 | 第35-36页 |
| 3.14 鹿胰岛素样生长因子1（IGF-1）ELISA检测 | 第36页 |
| 3.15 试验设计 | 第36-37页 |
| 3.15.0 鹿茸间充质细胞的分离培养和鉴定 | 第36页 |
| 3.15.1 shRNA转染效果的验证 | 第36页 |
| 3.15.2 MLT对鹿茸间充质细胞增殖的影响 | 第36-37页 |
| 3.15.3 MLT对鹿茸间充质细胞周期的影响 | 第37页 |
| 3.15.4 MLT对鹿茸间充质细胞内IGF-1和IGF-1R基因的影响 | 第37页 |
| 3.15.5 MLT对鹿茸间充质细胞IGF-1分泌的影响 | 第37页 |
| 3.15.6 MLT和IGF-1 对鹿茸间充质细胞增殖的影响 | 第37页 |
| 3.16 数据分析 | 第37-38页 |
| 4 实验结果 | 第38-48页 |
| 4.1 鹿茸间充质细胞的鉴定 | 第38页 |
| 4.2 MT1 RNAi重组质粒酶切鉴定及测序鉴定 | 第38-39页 |
| 4.3 MT1 RNAi重组质粒转染鹿茸间充质细胞 | 第39-40页 |
| 4.4 shRNA干扰效果检测 | 第40-42页 |
| 4.4.1 mRNA水平上检测干扰效果 | 第40-41页 |
| 4.4.2 蛋白水平上检测MT1干扰效果 | 第41-42页 |
| 4.5 MLT对鹿茸间充质细胞增殖的影响 | 第42-44页 |
| 4.5.1 MTT法检测鹿茸间充质细胞增殖的变化 | 第42-43页 |
| 4.5.2 MT1对鹿茸间充质细胞周期的影响 | 第43-44页 |
| 4.5.3 MLT对鹿茸间充质细胞增殖相关基因表达的影响 | 第44页 |
| 4.6 MLT对鹿茸间充质细胞IGF1和IGF1R表达的影响 | 第44-46页 |
| 4.7 干扰MT1对鹿茸间充质细胞分泌IGF-1的影响 | 第46页 |
| 4.8 IGF-1和MLT对鹿茸间充质细胞增殖的影响 | 第46-48页 |
| 5 讨论 | 第48-52页 |
| 5.1 鹿茸间充质细胞是研究鹿茸生长的良好组织细胞 | 第48页 |
| 5.2 MLT影响鹿茸间充质细胞的增殖 | 第48-50页 |
| 5.3 MLT通过提高鹿茸间充质细胞IGF-1表达促进其增殖 | 第50-52页 |
| 6 总结 | 第52-53页 |
| 6.1 本试验的主要结果 | 第52页 |
| 6.2 总结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
