| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第13-21页 |
| 1.1 链霉菌和抗生素 | 第13-15页 |
| 1.1.1 链霉菌简介 | 第13-14页 |
| 1.1.2 链霉菌源抗生素 | 第14-15页 |
| 1.2 抗生素生物合成的分子调控 | 第15-18页 |
| 1.3 有关放线紫红素和美达霉素 | 第18-19页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-38页 |
| 2.1 菌株 | 第21页 |
| 2.2 质粒 | 第21-22页 |
| 2.3 培养基 | 第22-23页 |
| 2.3.1 链霉菌培养基 | 第22-23页 |
| 2.3.2 大肠杆菌培养基 | 第23页 |
| 2.4 溶液和试剂 | 第23-28页 |
| 2.4.1 大肠杆菌质粒DNA小量提取试剂 | 第23-24页 |
| 2.4.2 Tricine-SDS-PAGE试剂 | 第24-25页 |
| 2.4.3 非变性聚丙烯酰胺凝胶试剂 | 第25-26页 |
| 2.4.4 Western blot试剂 | 第26页 |
| 2.4.5 非变性蛋白纯化试剂(His标签) | 第26-27页 |
| 2.4.6 蛋白透析液(10X) | 第27页 |
| 2.4.7 X光显影定影液 | 第27页 |
| 2.4.8 抗生素 | 第27-28页 |
| 2.4.9 缓冲液 | 第28页 |
| 2.4.10 其他试剂、酶和试剂盒 | 第28页 |
| 2.5 实验方法 | 第28-38页 |
| 2.5.1 大肠杆菌质粒DNA小量提取(碱性裂解法) | 第28-29页 |
| 2.5.2 大肠杆菌感受态细胞制备(CaCl2法)及转化 | 第29-30页 |
| 2.5.3 DNA体外操作 | 第30页 |
| 2.5.4 大肠杆菌菌种的保存 | 第30页 |
| 2.5.5 链霉菌的液体培养 | 第30页 |
| 2.5.6 链霉菌的固体培养 | 第30页 |
| 2.5.7 链霉菌孢子的收集 | 第30-31页 |
| 2.5.8 Tricine-SDS-PAGE(检测小分子量蛋白) | 第31页 |
| 2.5.9 Western blot | 第31-32页 |
| 2.5.10 非变性蛋白纯化(带His标签) | 第32页 |
| 2.5.11 多克隆抗体的制备 | 第32-33页 |
| 2.5.12 Pull down | 第33页 |
| 2.5.13 肽质谱分析 | 第33页 |
| 2.5.14 EMSA | 第33-38页 |
| 第三章 ActⅥ-ORFA蛋白的抗体制备及胞内表达检测 | 第38-45页 |
| 3.1 ActⅥ-ORFA表达质粒的构建 | 第38-39页 |
| 3.1.1 ActⅥ-ORFA基因的克隆 | 第38页 |
| 3.1.2 ActⅥ-ORFA原核表达系统的建立 | 第38-39页 |
| 3.2 ActⅥ-ORFA蛋白的原核表达和纯化 | 第39-41页 |
| 3.3 ActⅥ-ORFA蛋白的抗体制备和特异性检测 | 第41-42页 |
| 3.4 ActⅥ-ORFA蛋白体内表达检测 | 第42-44页 |
| 3.5 本章讨论 | 第44-45页 |
| 第四章 ActⅥ-ORFA蛋白的调控机制初步研究 | 第45-50页 |
| 4.1 靶基因启动子的扩增 | 第45页 |
| 4.2 生物素标记探针启动子PactⅥ-ORF1 | 第45-46页 |
| 4.3 ActⅥ-ORFA蛋白与P_(actⅥ-ORF1)结合反应 | 第46页 |
| 4.4 Pull-down实验 | 第46-48页 |
| 4.5 本章讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 Med-ORF10蛋白的抗体特异性改进 | 第50-56页 |
| 5.1 Med-ORF10蛋白串连体的构建 | 第50-51页 |
| 5.2 Med-ORF10蛋白串连体的表达和纯化 | 第51-52页 |
| 5.3 Med-ORF10蛋白串连体的多克隆抗体的制备 | 第52-53页 |
| 5.4 检测野生菌链霉菌和超表达菌链霉菌内Med-ORF10的表达情况 | 第53-55页 |
| 5.5 本章讨论 | 第55-56页 |
| 总结与展望 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第62-63页 |
| 附录 | 第63-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
