| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 英文缩写词表 | 第8-14页 |
| 1 前言 | 第14-23页 |
| 1.1 NLRP蛋白家族 | 第14页 |
| 1.2 NLRP3炎症小体的结构及分布情况 | 第14-15页 |
| 1.3 NLRP3炎症小体的激活机制 | 第15-16页 |
| 1.3.1 腺苷三磷酸（ATP）介导的激活途径 | 第15页 |
| 1.3.2 溶酶体破裂介导的激活途径 | 第15-16页 |
| 1.3.3 活性氧介导的激活途径 | 第16页 |
| 1.3.4 钙离子介导的激活途径 | 第16页 |
| 1.4 NLRP3炎症小体参与机体炎症反应的途径及其机制 | 第16-17页 |
| 1.5 NLRP3炎症小体与各类疾病的关系 | 第17-20页 |
| 1.5.1 脑部疾病与NLRP3炎症小体的关系 | 第17-18页 |
| 1.5.2 肺部疾病与NLRP3炎症小体的关系 | 第18页 |
| 1.5.3 心血管疾病与NLRP3炎症小体的关系 | 第18页 |
| 1.5.4 肝脏疾病与NLRP3炎症小体的关系 | 第18-19页 |
| 1.5.5 肾脏疾病与NLRP3炎症小体的关系 | 第19页 |
| 1.5.6 肠道疾病与NLRP3炎症小体的关系 | 第19页 |
| 1.5.7 其它疾病与NLRP3炎症小体的关系 | 第19-20页 |
| 1.6 NLRP3炎症小体与病原微生物的关系 | 第20-22页 |
| 1.6.1 细菌 | 第20-21页 |
| 1.6.2 病毒 | 第21页 |
| 1.6.3 真菌 | 第21-22页 |
| 1.6.4 原虫 | 第22页 |
| 1.7 研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 2 材料 | 第23-29页 |
| 2.1 实验动物 | 第23页 |
| 2.2 菌株和质粒 | 第23页 |
| 2.3 抗体 | 第23页 |
| 2.4 主要试剂及试剂盒 | 第23-25页 |
| 2.4.1 主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.4.2 主要试剂盒 | 第24-25页 |
| 2.5 主要溶液的配制 | 第25-27页 |
| 2.5.1 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）用溶液的配制 | 第25-26页 |
| 2.5.2 Western blotting免疫印迹用溶液的配制 | 第26页 |
| 2.5.3 酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂配制 | 第26页 |
| 2.5.4 RNA提取用试剂的配制 | 第26页 |
| 2.5.5 琼脂糖电泳用试剂的配制 | 第26-27页 |
| 2.5.6 大肠杆菌感受态的制备及转化用溶液的配制 | 第27页 |
| 2.5.7 免疫组化相关溶液的配制 | 第27页 |
| 2.6 主要仪器设备 | 第27-28页 |
| 2.7 分析工具软件 | 第28-29页 |
| 3 方法 | 第29-46页 |
| 3.1 海南黑山羊NLRP3与caspase-1 基因的克隆 | 第29-36页 |
| 3.1.1 海南黑山羊血液总RNA的提取 | 第29页 |
| 3.1.2 引物的设计与合成 | 第29-30页 |
| 3.1.3 c DNA的合成 | 第30-31页 |
| 3.1.4 PCR扩增黑山羊NLRP3基因和caspase-1 基因 | 第31-32页 |
| 3.1.5 PCR产物的回收 | 第32-33页 |
| 3.1.6 感受态细胞（JM109）的制备（氯化钙法） | 第33页 |
| 3.1.7 pMD18-T载体的连接反应 | 第33页 |
| 3.1.8 连接产物的转化 | 第33-34页 |
| 3.1.9 阳性质粒菌落PCR鉴定 | 第34页 |
| 3.1.10 质粒的提取 | 第34-36页 |
| 3.1.11 重组质粒的序列测定及分析 | 第36页 |
| 3.2 表达质粒pET32a-NLRP3与p ET32a-caspase-1 的构建 | 第36-38页 |
| 3.2.1 pET32a-NLRP3表达质粒的构建 | 第36-38页 |
| 3.2.2 pET32a-caspase-1 表达质粒的构建 | 第38页 |
| 3.3 NLRP3与caspase-1 的原核诱导表达 | 第38-39页 |
| 3.3.1 诱导表达 | 第38-39页 |
| 3.3.2 SDS-PAGE鉴定 | 第39页 |
| 3.4 海南黑山羊NLRP3与caspase-1 重组蛋白的纯化 | 第39-40页 |
| 3.4.1 制备表达NLRP3和caspase-1 重组蛋白的细菌抽提物 | 第39页 |
| 3.4.2 割胶纯化蛋白 | 第39-40页 |
| 3.4.3 蛋白溶液的浓缩及浓度测定 | 第40页 |
| 3.5 NLRP3与caspase-1 蛋白多克隆抗体的制备 | 第40-41页 |
| 3.5.1 动物免疫 | 第40页 |
| 3.5.2 采血 | 第40页 |
| 3.5.3 血清的分离及保存 | 第40页 |
| 3.5.4 间接ELISA测抗体效价 | 第40-41页 |
| 3.6 Western Blot免疫印迹检测多抗特异性 | 第41-42页 |
| 3.6.1 转印装置的组装 | 第41页 |
| 3.6.2 蛋白转印 | 第41页 |
| 3.6.3 免疫反应 | 第41-42页 |
| 3.6.4 检测 | 第42页 |
| 3.7 海南黑山羊NLRP3、ASC、caspase-1 基因荧光定量实验 | 第42-45页 |
| 3.7.1 引物的设计与合成 | 第42-43页 |
| 3.7.2 PCR扩增黑山羊7个组织的NLRP3、ASC和caspase-1 基因荧光片段 | 第43-45页 |
| 3.8 海南黑山羊NLRP3、ASC、caspase-1 蛋白的组织学分布 | 第45-46页 |
| 3.8.1 免疫组化的实验步骤 | 第45-46页 |
| 3.8.2 免疫组化结果的判定 | 第46页 |
| 4 结果与分析 | 第46-62页 |
| 4.1 海南黑山羊NLRP3基因与caspase-1 基因的克隆 | 第46页 |
| 4.2 海南黑山羊NLRP3基因和caspase-1 基因的序列分析 | 第46-49页 |
| 4.2.1 海南黑山羊NLRP3基因的序列分析 | 第46-48页 |
| 4.2.2 海南黑山羊caspase-1 基因的序列分析 | 第48-49页 |
| 4.3 海南黑山羊NLRP3与caspase-1 基因重组表达质粒的鉴定 | 第49-50页 |
| 4.4 海南黑山羊NLRP3、caspase-1 基因的原核表达与蛋白纯化 | 第50-51页 |
| 4.4.1 NLRP3与caspase-1 基因的诱导表达 | 第50-51页 |
| 4.4.2 重组蛋白NLRP3、caspase-1 的纯化 | 第51页 |
| 4.5 海南黑山羊NLRP3与caspase-1 蛋白多克隆抗体制备 | 第51-52页 |
| 4.6 海南黑山羊NLRP3、ASC、caspase-1 基因荧光定量结果与分析 | 第52-59页 |
| 4.6.1 海南黑山羊荧光定量实验NLRP3、ASC、caspase-1 基因的鉴定 | 第52-53页 |
| 4.6.2 荧光定量实验溶解曲线 | 第53-54页 |
| 4.6.3 荧光定量PCR扩增曲线 | 第54-56页 |
| 4.6.4 标准曲线 | 第56-57页 |
| 4.6.5 NLRP3基因在各个组织的相对表达水平 | 第57-58页 |
| 4.6.6 ASC基因在各个组织的相对表达水平 | 第58页 |
| 4.6.7 caspase-1 基因在各个组织的相对表达水平 | 第58-59页 |
| 4.7 海南黑山羊NLRP3、ASC和caspase-1 蛋白的组织学分布 | 第59-62页 |
| 4.7.1 黑山羊NLRP3蛋白的组织学分布 | 第59-60页 |
| 4.7.2 黑山羊ASC蛋白的组织学分布 | 第60-61页 |
| 4.7.3 黑山羊caspase-1 蛋白的组织学分布 | 第61-62页 |
| 5 讨论 | 第62-64页 |
| 6 结论 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-74页 |
| 附录 | 第74页 |
