| 摘要 | 第4-6页 |
| Summary | 第6-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-27页 |
| 1 兰州鲇研究现状 | 第12页 |
| 2 DNA分子标记种类及特点 | 第12-22页 |
| 2.1 限制性片段长度多态性标记(RFLP) | 第13-14页 |
| 2.2 随机扩增多态性DNA标记(RAPD) | 第14页 |
| 2.3 扩增片段长度多态性标记(AFLP) | 第14-15页 |
| 2.4 线粒体DNA(mtDNA)多态性 | 第15页 |
| 2.5 微卫星标记(SSR) | 第15-20页 |
| 2.5.1 微卫星类型 | 第16页 |
| 2.5.2 微卫星基因分型方法 | 第16-20页 |
| 2.6 简单序列重复区间(ISSR) | 第20-21页 |
| 2.7 单核甘酸多态性(SNP) | 第21-22页 |
| 3 EST-SSR分子标记开发策略 | 第22-25页 |
| 3.1 EST-SSR的主要特点 | 第22页 |
| 3.2 EST-SSR分子标记开发的方法 | 第22-24页 |
| 3.2.1 依据dbEST数据库开发 | 第22页 |
| 3.2.2 借用近缘物种EST-SSR | 第22-23页 |
| 3.2.3 基于转录组高通量测序法 | 第23-24页 |
| 3.3 EST-SSR标记的应用 | 第24-25页 |
| 5 本研究的目的和意义 | 第25页 |
| 6 本研究技术路线 | 第25-27页 |
| 6.1 磁珠富集法筛选EST-SSR示意图 | 第25-26页 |
| 6.2 本研究整体技术路线 | 第26-27页 |
| 第二章 兰州鲇EST-SSR分子标记开发 | 第27-44页 |
| 1 实验材料 | 第27-30页 |
| 1.1 试验动物 | 第27页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第27页 |
| 1.3 主要试剂及材料 | 第27-28页 |
| 1.4 溶液、试剂配制 | 第28-30页 |
| 1.4.1 RNA提取相关试剂配制 | 第28页 |
| 1.4.2 琼脂糖凝胶电泳试剂配制 | 第28页 |
| 1.4.3 双链cDNA合成相关试剂 | 第28-29页 |
| 1.4.4 探针与磁珠杂交、洗脱相关试剂配制 | 第29页 |
| 1.4.5 TA克隆相关试剂配制 | 第29-30页 |
| 2 试验方法 | 第30-37页 |
| 2.1 兰州鲇脑组织总RNA提取 | 第30-31页 |
| 2.2 RNA完整性、浓度和纯度检测 | 第31-32页 |
| 2.2.1 1.2%琼脂糖凝胶检测 | 第31-32页 |
| 2.2.2 微量分光光度计检测 | 第32页 |
| 2.3 双链cDNA合成 | 第32-34页 |
| 2.3.1 c DNA第一条链的合成 | 第32-33页 |
| 2.3.2 c DNA第二条链的合成 | 第33-34页 |
| 2.3.3 双链cDNA纯化 | 第34页 |
| 2.4 微卫星接头序列制备 | 第34页 |
| 2.5 微卫星接头与平末端双链cDNA连接 | 第34页 |
| 2.6 cDNA PCR预扩增 | 第34-35页 |
| 2.7 生物素探针杂交 | 第35页 |
| 2.8 目的片段磁珠富集 | 第35页 |
| 2.8.1 链霉亲和素磁珠预处理 | 第35页 |
| 2.8.2 磁珠富集 | 第35页 |
| 2.8.3 磁珠洗脱 | 第35页 |
| 2.9 双链目的片段合成及特定大小双链cDNA获取 | 第35-36页 |
| 2.9.1 单链cDNA扩增 | 第35页 |
| 2.9.2 特定大小双链cDNA获取 | 第35-36页 |
| 2.10 EST-SSR富集文库构建与测序 | 第36-37页 |
| 2.10.1 连接与转化 | 第36页 |
| 2.10.2 阳性克隆筛选与测序 | 第36-37页 |
| 2.10.3 序列分析与数据统计 | 第37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-41页 |
| 3.1 脑组织总RNA的提取和双链cDNA的合成 | 第37-38页 |
| 3.2 单链cDNA的PCR扩增 | 第38页 |
| 3.3 双引物菌液PCR筛选阳性克隆 | 第38-39页 |
| 3.4 EST-SSR富集文库的鉴定 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-44页 |
| 4.1 磁珠富集法开发兰州鲇EST-SSR分子标记 | 第41-42页 |
| 4.2 影响磁珠富集法筛选微卫星标记效率的因素 | 第42页 |
| 4.3 兰州鲇EST-SSR标记的类型及特征分析 | 第42-44页 |
| 第三章 兰州鲇多态性EST-SSR分子标记筛选 | 第44-53页 |
| 1 实验材料 | 第44-45页 |
| 1.1 试验样本采集 | 第44页 |
| 1.2 主要实验设备 | 第44页 |
| 1.3 主要试剂及材料 | 第44页 |
| 1.4 溶液试剂配制 | 第44-45页 |
| 1.4.1 DNA提取试剂配制 | 第44页 |
| 1.4.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳试剂配制 | 第44-45页 |
| 2 试验方法 | 第45-48页 |
| 2.1 兰州鲇基因组DNA提取 | 第45-46页 |
| 2.2 DNA提取结果检测 | 第46页 |
| 2.3 EST-SSR引物设计及PCR扩增 | 第46页 |
| 2.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳筛具有多态性的EST-SSR | 第46-47页 |
| 2.4.1 PCR扩增 | 第46页 |
| 2.4.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第46-47页 |
| 2.5 数据统计 | 第47-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-51页 |
| 3.1 兰州鲇基因组DNA提取 | 第48页 |
| 3.2 兰州鲇EST-SSR分子标记PCR结果 | 第48-50页 |
| 3.3 兰州鲇具有多态性EST-SSR引物筛选 | 第50-51页 |
| 3.4 兰州鲇EST-SSR的群体遗传多样性分析 | 第51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 4.1 酚-氯仿法结合DNA纯化试剂盒提取DNA | 第51-52页 |
| 4.3 兰州鲇EST-SSR标记的多态性分析 | 第52-53页 |
| 第四章 兰州鲇G-SSR和EST-SSR在鲇形目和鲤形目鱼类的通用性研究 | 第53-58页 |
| 1 实验材料 | 第53-54页 |
| 1.1 试验样本采集 | 第53页 |
| 1.2 主要实验设备 | 第53页 |
| 1.3 主要试剂及材料 | 第53页 |
| 1.4 微卫星引物 | 第53-54页 |
| 2 试验方法 | 第54页 |
| 2.1 12种不同鱼类基因组DNA提取 | 第54页 |
| 2.2 兰州鲇G-SSR和EST-SSR通用性检测 | 第54页 |
| 2.3 数据统计 | 第54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-57页 |
| 3.1 12种不同鱼类基因组DNA提取 | 第54页 |
| 3.2 兰州鲇G-SSR和EST-SSR通用性 | 第54-57页 |
| 3.2.1 兰州鲇G-SSR和EST-SSR在12种鱼类的扩增结果 | 第54-56页 |
| 3.2.2 G-SSR和EST-SSR扩增图谱分析 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-58页 |
| 第五章 结论、试验不足与展望 | 第58-60页 |
| 一、全文结论 | 第58页 |
| 二、试验不足与展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 作者简介 | 第69-70页 |
| 导师简介 | 第70-71页 |
