| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 1 文献综述 | 第11-27页 |
| 1.1 葡萄糖脱氢酶 | 第11-14页 |
| 1.1.1 NADP依赖型葡萄糖脱氢酶 | 第11页 |
| 1.1.2 葡萄糖脱氢酶的理化性质 | 第11-12页 |
| 1.1.3 葡萄糖脱氢酶的应用 | 第12-14页 |
| 1.2 重组大肠杆菌表达系统 | 第14-15页 |
| 1.2.1 大肠杆菌表达系统的组成 | 第14-15页 |
| 1.2.2 pET表达系统 | 第15页 |
| 1.3 大肠杆菌的高密度发酵 | 第15-21页 |
| 1.3.1 影响大肠杆菌高密度发酵的条件 | 第16-19页 |
| 1.3.2 发酵过程建模 | 第19-21页 |
| 1.4 酶反应动力学 | 第21-26页 |
| 1.4.1 单底物反应动力学 | 第21-23页 |
| 1.4.2 多底物反应动力学 | 第23-25页 |
| 1.4.3 酶抑制动力学 | 第25-26页 |
| 1.5 本课题的基本思路和拟研究内容 | 第26-27页 |
| 2 葡萄糖脱氢酶的表达优化 | 第27-45页 |
| 2.1 引言 | 第27页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第27-34页 |
| 2.2.1 主要实验试剂 | 第27-28页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第28-29页 |
| 2.2.3 菌种 | 第29页 |
| 2.2.4 培养基 | 第29页 |
| 2.2.5 培养条件 | 第29-30页 |
| 2.2.6 细胞生长测定 | 第30页 |
| 2.2.7 粗酶液的提取 | 第30页 |
| 2.2.8 葡萄糖脱氢酶酶活的测定 | 第30-34页 |
| 2.3 实验结果与讨论 | 第34-43页 |
| 2.3.1 葡萄糖脱氢酶表达体系的筛选 | 第34页 |
| 2.3.2 产酶培养基的优化 | 第34-36页 |
| 2.3.3 微量元素浓度的优化 | 第36-37页 |
| 2.3.4 摇瓶接种量的优化 | 第37-38页 |
| 2.3.5 摇瓶装液量的优化 | 第38-39页 |
| 2.3.6 诱导剂加入时间的优化 | 第39-41页 |
| 2.3.7 诱导温度的优化 | 第41-42页 |
| 2.3.8 诱导剂浓度的优化 | 第42页 |
| 2.3.9 诱导后表达时间的优化 | 第42-43页 |
| 2.4 本章小结 | 第43-45页 |
| 3 重组大肠杆菌扩大培养和和分批发酵动力学 | 第45-64页 |
| 3.1 前言 | 第45页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第45-50页 |
| 3.2.1 主要实验试剂 | 第45-46页 |
| 3.2.2 主要化学仪器 | 第46页 |
| 3.2.3 菌种 | 第46页 |
| 3.2.4 培养基 | 第46页 |
| 3.2.5 培养条件 | 第46页 |
| 3.2.6 细胞破碎方式 | 第46-47页 |
| 3.2.7 酶粉的制备 | 第47-48页 |
| 3.2.8 菌体干重的测定 | 第48页 |
| 3.2.9 葡萄糖浓度的测定 | 第48-50页 |
| 3.2.10 酶活的测定 | 第50页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第50-62页 |
| 3.3.1 大肠杆菌分批发酵生长代谢的变化 | 第50-51页 |
| 3.3.2 菌体生长动力学模型 | 第51-53页 |
| 3.3.3 产物合成动力学模型 | 第53-55页 |
| 3.3.4 葡萄糖消耗动力学模型 | 第55-56页 |
| 3.3.5 pH-stat分批补料发酵 | 第56-57页 |
| 3.3.6 破胞方式的选择 | 第57-62页 |
| 3.3.7 酶干粉的制备 | 第62页 |
| 3.4 本章小结 | 第62-64页 |
| 4 重组葡萄糖脱氢酶酶学性质研究 | 第64-83页 |
| 4.1 引言 | 第64页 |
| 4.2 材料与方法 | 第64-68页 |
| 4.2.1 主要实验试剂 | 第64-65页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第65页 |
| 4.2.3 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第65-66页 |
| 4.2.4 盐析 | 第66页 |
| 4.2.5 酶促反应速度的计算 | 第66-67页 |
| 4.2.6 葡萄糖脱氢酶性质的研究 | 第67-68页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第68-82页 |
| 4.3.1 盐析曲线 | 第68-69页 |
| 4.3.2 SDS-PAGE分析 | 第69-70页 |
| 4.3.3 GDH的最适反应温度和温度稳定性 | 第70-74页 |
| 4.3.4 GDH的最适反应pH和pH稳定性分析 | 第74-75页 |
| 4.3.5 GDH底物专一性研究 | 第75-76页 |
| 4.3.6 金属离子对酶活的影响 | 第76页 |
| 4.3.7 有机溶剂对酶活的影响 | 第76-77页 |
| 4.3.8 GDH酶促反应动力学研究 | 第77-82页 |
| 4.4 本章小结 | 第82-83页 |
| 5 结论与展望 | 第83-85页 |
| 5.1 结论 | 第83-84页 |
| 5.2 展望 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 作者简介 | 第91页 |