| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 第一部分: Stra8在精子发生中下游作用基因及调控网络的初步研究 | 第11-48页 |
| 前言 | 第11-14页 |
| 1.1 实验材料 | 第14-16页 |
| 1.1.1 实验动物 | 第14页 |
| 1.1.2 实验试剂 | 第14-15页 |
| 1.1.3 实验仪器 | 第15-16页 |
| 1.2 实验方法 | 第16-31页 |
| 1.2.1 Stra8.KO小鼠基因型鉴定 | 第16-19页 |
| 1.2.2 石蜡切片制作 | 第19-20页 |
| 1.2.3 HE染色 | 第20-21页 |
| 1.2.4 免疫组织荧光法 | 第21-22页 |
| 1.2.5 统计学分析 | 第22页 |
| 1.2.6 RNA-Sequnce | 第22-27页 |
| 1.2.7 qRT-PCR | 第27-31页 |
| 1.3 实验结果 | 第31-44页 |
| 1.3.1 Stra8.KO小鼠基因型鉴定 | 第31-32页 |
| 1.3.2 HE染色观察不同阶段睾丸组织结构 | 第32-34页 |
| 1.3.3 生精细胞标志物Ddx4免疫组织荧光结果 | 第34-35页 |
| 1.3.4 不同精子发生阶段生精细胞数变化规律 | 第35-36页 |
| 1.3.5 RNA-Sequence实验结果 | 第36-42页 |
| 1.3.6 差异基因的qRT-PCR验证 | 第42-43页 |
| 1.3.7 Stra8下游调控网络的可能性分析 | 第43-44页 |
| 讨论 | 第44-48页 |
| 第二部分: 兔抗小鼠Setd8多克隆抗体的制备 | 第48-71页 |
| 前言 | 第48-49页 |
| 2.1 实验材料 | 第49-52页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第49页 |
| 2.1.2 实验用菌株、细胞系及载体质粒 | 第49-50页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第50页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第50-52页 |
| 2.2 实验方法 | 第52-63页 |
| 2.2.1 pET-30a-Setd8表达载体的构建 | 第52-55页 |
| 2.2.2 Setd8原核蛋白的表达 | 第55页 |
| 2.2.3 Setd8原核蛋白的提取 | 第55-57页 |
| 2.2.4 Setd8原核蛋白的纯化、复性 | 第57-58页 |
| 2.2.5 Setd8多克隆抗体制备 | 第58页 |
| 2.2.6 ELISA抗体效价检测 | 第58-59页 |
| 2.2.7 Western blot | 第59-61页 |
| 2.2.8 免疫组织化学 | 第61-63页 |
| 2.3 实验结果 | 第63-70页 |
| 2.3.1 pET-30a-Setd8表达载体的构建及鉴定 | 第63-64页 |
| 2.3.2 Setd8原核蛋白的表达 | 第64-65页 |
| 2.3.3 Setd8原核蛋白的提取 | 第65-66页 |
| 2.3.4 Setd8原核蛋白的纯化、复性 | 第66-67页 |
| 2.3.5 Setd8多克隆抗体效价的检测 | 第67-68页 |
| 2.3.6 多克隆抗体特异识别HEK293T细胞Setd8蛋白 | 第68-69页 |
| 2.3.7 Setd8蛋白主要表达在睾丸精原细胞 | 第69-70页 |
| 讨论 | 第70-71页 |
| 第三部分: 成年小鼠睾丸内精原细胞及精母细胞的纯化 | 第71-81页 |
| 前言 | 第71-72页 |
| 3.1 实验材料 | 第72-73页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第72页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第72页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第72-73页 |
| 3.2 实验方法(Percoll非连续密度梯度分离法) | 第73-76页 |
| 3.2.1 睾丸组织单细胞悬液的制备 | 第73页 |
| 3.2.2 Percoll密度梯度分离 | 第73-74页 |
| 3.2.3 瑞-姬染色 | 第74-75页 |
| 3.2.4 生精细胞的鉴别和计数 | 第75-76页 |
| 3.3 实验结果 | 第76-79页 |
| 3.3.1 酶消化结果 | 第76-77页 |
| 3.3.2 Percoll密度梯度分离结果 | 第77-78页 |
| 3.3.3 细胞鉴别及计数 | 第78-79页 |
| 讨论 | 第79-81页 |
| 总结 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-88页 |
| 综述 | 第88-94页 |
| 参考文献 | 第91-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第95-96页 |
