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TET1表观修饰BCL6B调控胃癌进展的机制

英文缩略词表第7-8页
摘要第8-10页
Abstract第10-12页
第一章 前言第13-20页
    1.1、胃癌的研究概况第13-14页
    1.2、表观遗传学调控的分子学机制第14-17页
        1.2.1 表观遗传学的定义第14-15页
        1.2.2 DNA异常甲基化调控,第15-17页
    1.3、BCL6B抑癌基因第17-18页
        1.3.1 BCL6B的基本特征第17页
        1.3.2 BCL6B与肿瘤第17-18页
    1.4.实验方案设计第18-20页
        1.4.1 在胃癌细胞系中研究TET1靶向调控BCL6B的表达情况第18-19页
        1.4.2 拟证实胃癌细胞系中BCL6B是TET1表观调控的直接下游靶基因第19页
        1.4.3 研究TET1-BCL6B调节链调控胃癌肿瘤发生发展以及耐药能力的功能作用第19-20页
第二章 实验方法第20-36页
    2.1、分子克隆实验方法第20-26页
        2.1.1 感受态细胞的制备第20-21页
        2.1.2 DNA转化第21页
        2.1.3 质粒抽提第21-22页
        2.1.4 DNA样品琼脂糖凝胶电泳第22-23页
        2.1.5 琼脂糖凝胶回收目的DNA片段第23-24页
        2.1.6 DNA片段连接反应第24-25页
        2.1.7 PCR反应第25-26页
    2.2 蛋白质、核酸相关实验方法第26-29页
        2.2.1.全细胞裂解物以及组织裂解物的制备第26-27页
        2.2.2 q RT-PCR检测细胞RNA第27-29页
            2.2.2.1 TRIzol法提取RNA第27-28页
            2.2.2.2 RNA逆转录第28页
            2.2.2.3 实时荧光定量PCR第28-29页
    2.3、细胞相关实验方法第29-31页
        2.3.1 细胞的传代培养第29-30页
        2.3.2 细胞转染第30-31页
            2.3.2.1 慢病毒感染7901细胞第30页
            2.3.2.2 慢病毒的包装与感染制备稳转株第30-31页
    2.4、甲基化检测第31-35页
        2.4.1 细胞基因组提取第31-33页
        2.4.2 甲基化DNA检测第33-34页
        2.4.3 将DNA酶切后连接至T载体后公司做BSP第34-35页
            2.4.3.1 T载体连接第34-35页
            2.4.3.2 BSP测序引物第35页
    2.5、裸鼠成瘤实验第35-36页
    2.6、统计学方法处理实验数据第36页
第三章 实验结果与分析第36-43页
    3.1、TET1和BCL6B在胃癌细胞株中的表达及甲基化改变第37-40页
        3.1.1 Western blot方法和q RT-PCR方法测定TET1与BCL6B与SGC7901与SGC7901/DDP中的表达情况:第37-38页
        3.1.2 亚硫酸盐测序法(BSP)检测SGC7901与SGC7901/DDP细胞的甲基化结果第38-39页
        3.1.3 在SGC7901细胞株中通过稳转的方式过表达以及敲减TET1并检测其是否影响BCL6B的表达变化第39-40页
    3.2、BCL6B基因功能方面的探究第40-41页
        3.2.1 Western blot与q RTPCR法 比较SGC7901与SGC7901/DDP耐药实验后中BCL6B的表达第40页
        3.2.2 利用慢病毒感染技术构建BCL6B稳定敲减的SGC7901胃癌细胞株,以及BCL6B稳定过表达的SGC7901/DDP胃癌细胞株,并利用MTT法检测各组细胞对顺铂化疗的耐受能力第40-41页
    3.3、BCL6B的体外实验第41-43页
        3.3.1 裸鼠成瘤实验第41-42页
        3.3.2 药物诱导BCL6B K.O.小鼠体内胃癌形成第42-43页
第四章 讨论第43-45页
第五章 总结第45-46页
参考文献第46-51页
课题综述第51-59页
    参考文献第56-59页
致谢第59-60页

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