| 中文摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-18页 |
| 1 朱砂叶螨抗药性研究进展 | 第12页 |
| 2 阿维菌素及其抗药性研究进展 | 第12-14页 |
| 3 P-糖蛋白研究进展 | 第14-18页 |
| 3.1 ABC转运蛋白超家族 | 第14-15页 |
| 3.2 P-糖蛋白结构及功能 | 第15页 |
| 3.3 P-糖蛋白抗药性 | 第15-18页 |
| 引言 | 第18-20页 |
| 第2章 阿维菌素对朱砂叶螨的毒力测定 | 第20-24页 |
| 1 材料与方法 | 第20-21页 |
| 1.1 供试朱砂叶螨 | 第20页 |
| 1.2 主要试剂 | 第20页 |
| 1.3 实验材料 | 第20页 |
| 1.4 叶碟制作方法 | 第20页 |
| 1.5 毒力测定方法 | 第20-21页 |
| 1.6 阿维菌素对朱砂叶螨SS和AbR的毒力测定 | 第21页 |
| 1.7 抑制剂处理后阿维菌素对朱砂叶螨SS和AbR的毒力测定 | 第21页 |
| 2 结果与分析 | 第21-22页 |
| 3 讨论 | 第22-24页 |
| 第3章 朱砂叶螨P-糖蛋白ATPase活性测定 | 第24-34页 |
| 1 材料与方法 | 第24-28页 |
| 1.1 供试朱砂叶螨 | 第24页 |
| 1.2 主要试剂及仪器 | 第24-25页 |
| 1.2.1 试剂 | 第24-25页 |
| 1.2.2 仪器 | 第25页 |
| 1.3 试剂配制 | 第25-26页 |
| 1.4 酶源蛋白样品制备 | 第26页 |
| 1.5 牛血清蛋白标准曲线制作 | 第26页 |
| 1.6 酶源蛋白含量的测定 | 第26-27页 |
| 1.7 P-糖蛋白ATPase活性测定 | 第27-28页 |
| 1.7.1 磷波长测定 | 第27页 |
| 1.7.2 磷标准曲线制作 | 第27-28页 |
| 1.7.3 P-糖蛋白ATPase活性测定 | 第28页 |
| 1.7.4 药剂诱导后P-糖蛋白ATPase活性测定 | 第28页 |
| 1.7.5 P-糖蛋白ATPase K_m和V_(max)测定 | 第28页 |
| 1.8 数据分析 | 第28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-31页 |
| 2.1 牛血清蛋白标准曲线 | 第28-29页 |
| 2.2 磷波长测定 | 第29页 |
| 2.3 磷标准曲线 | 第29-30页 |
| 2.4 P-糖蛋白ATPase的性质 | 第30-31页 |
| 2.4.1 朱砂叶螨SS和AbR的P-糖蛋白ATPase活性比较 | 第30页 |
| 2.4.2 药剂诱导后朱砂叶螨SS和AbR的P-糖蛋白ATPase活性比较 | 第30-31页 |
| 2.4.3 朱砂叶螨SS和AbR的P-糖蛋白ATPase对底物亲和力比较 | 第31页 |
| 3 讨论 | 第31-34页 |
| 第4章 朱砂叶螨P-糖蛋白基因cDNA克隆及分析 | 第34-48页 |
| 1 材料与方法 | 第34-43页 |
| 1.1 供试朱砂叶螨 | 第34页 |
| 1.2 主要试剂及仪器 | 第34-35页 |
| 1.2.1 试剂 | 第34页 |
| 1.2.2 仪器 | 第34-35页 |
| 1.3 常用储备液及培养基的配制 | 第35-36页 |
| 1.4 朱砂叶螨总RNA的提取 | 第36-37页 |
| 1.4.1 提取RNA所需耗材处理方法 | 第36页 |
| 1.4.2 RNA提取步骤 | 第36-37页 |
| 1.4.3 RNA质量检测 | 第37页 |
| 1.5 朱砂叶螨P-糖蛋白基因片段的扩增 | 第37-40页 |
| 1.5.1 引物设计 | 第38页 |
| 1.5.2 cDNA第一链的合成 | 第38-39页 |
| 1.5.3 PCR扩增 | 第39-40页 |
| 1.6 朱砂叶螨P-糖蛋白基因全长验证 | 第40页 |
| 1.6.1 引物设计 | 第40页 |
| 1.6.2 cDNA第一链的合成 | 第40页 |
| 1.6.3 PCR扩增 | 第40页 |
| 1.7 目的片段的克隆和测序 | 第40-43页 |
| 1.7.1 PCR产物的凝胶电泳 | 第40页 |
| 1.7.2 靶DNA片段的回收 | 第40-41页 |
| 1.7.3 靶DNA片段与载体的体外连接 | 第41页 |
| 1.7.4 质粒DNA的转化 | 第41-42页 |
| 1.7.5 蓝白斑筛选 | 第42页 |
| 1.7.6 重组质粒的菌液PCR扩增鉴定 | 第42-43页 |
| 1.7.7 克隆产物的测序 | 第43页 |
| 1.8 朱砂叶螨P-糖蛋白基因的cDNA序列分析 | 第43页 |
| 2 结果 | 第43-47页 |
| 2.1 朱砂叶螨总RNA的提取结果 | 第43页 |
| 2.2 朱砂叶螨P-糖蛋白基因片段的扩增结果 | 第43-45页 |
| 2.3 朱砂叶螨P-糖蛋白基因拼接序列的扩增结果 | 第45页 |
| 2.4 朱砂叶螨两条P-糖蛋白基因的生物学信息分析 | 第45-47页 |
| 3 讨论 | 第47-48页 |
| 第5章 朱砂叶螨阿维菌素抗性品系P-糖蛋白基因突变分析 | 第48-52页 |
| 1 材料与方法 | 第48-49页 |
| 1.1 供试朱砂叶螨 | 第48页 |
| 1.2 主要试剂及仪器 | 第48页 |
| 1.3 常用储备液及培养基的配置 | 第48页 |
| 1.4 总RNA的提取 | 第48页 |
| 1.5 特异性引物设计 | 第48页 |
| 1.6 cDNA第一链的合成 | 第48页 |
| 1.7 PCR扩增 | 第48页 |
| 1.8 目的片段的克隆和测序 | 第48页 |
| 1.9 朱砂叶螨敏感和抗性品系的氨基酸序列分析 | 第48-49页 |
| 2 结果 | 第49-50页 |
| 2.1 朱砂叶螨总RNA的提取结果 | 第49页 |
| 2.2 基因的特异性扩增结果 | 第49页 |
| 2.3 氨基酸序列突变分析结果 | 第49-50页 |
| 3 讨论 | 第50-52页 |
| 第6章 朱砂叶螨P-糖蛋白基因mRNA的表达研究 | 第52-62页 |
| 1 材料与方法 | 第52-54页 |
| 1.1 供试朱砂叶螨 | 第52页 |
| 1.2 主要试剂和仪器 | 第52页 |
| 1.3 定量PCR引物设计 | 第52页 |
| 1.4 总RNA的提取 | 第52-53页 |
| 1.4.1 朱砂叶螨SS不同螨态的收集 | 第52-53页 |
| 1.4.2 朱砂叶螨SS和AbR雌成螨的收集 | 第53页 |
| 1.4.3 药剂诱导后朱砂叶螨SS和AbR雌成螨的收集 | 第53页 |
| 1.4.4 朱砂叶螨SS不同螨态及SS和AbR雌成螨总RNA的提取 | 第53页 |
| 1.5 反转录合成cDNA | 第53页 |
| 1.6 溶解曲线分析 | 第53-54页 |
| 1.7 标准曲线的建立 | 第54页 |
| 1.8 朱砂叶螨P-糖蛋白基因mRNA的定量检测 | 第54页 |
| 1.9 数据分析 | 第54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-60页 |
| 2.1 朱砂叶螨总RNA提取结果 | 第54-55页 |
| 2.2 溶解曲线 | 第55-56页 |
| 2.3 标准曲线 | 第56-58页 |
| 2.4 朱砂叶螨不同螨态P-糖蛋白基因mRNA表达量分析 | 第58页 |
| 2.5 朱砂叶螨SS和AbR的P-糖蛋白基因mRNA表达量分析 | 第58-59页 |
| 2.6 药剂诱导后朱砂叶螨SS和AbR的P-糖蛋白基因mRNA表达量分析 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-62页 |
| 第7章 展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
