| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第10-24页 |
| 1.1 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1.1 植物作为生物反应器应用的研究进展 | 第10-14页 |
| 1.1.2 RNA干扰在疾病治疗上应用的研究进展 | 第14-22页 |
| 1.2 课题的提出 | 第22页 |
| 1.3 课题研究的目的与意义 | 第22-24页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第24-39页 |
| 2.1 植物材料 | 第24页 |
| 2.2 质粒、菌株与试剂 | 第24页 |
| 2.2.1 质粒和菌株 | 第24页 |
| 2.2.2 相关试剂 | 第24页 |
| 2.3 靶向序列的设计 | 第24-25页 |
| 2.3.1 靶向丙型肝炎病毒基因组序列的选择 | 第24-25页 |
| 2.3.2 靶向PGC1α mRNA序列的选择 | 第25页 |
| 2.4 表达骨架的选择 | 第25页 |
| 2.5 表达载体的构建 | 第25-33页 |
| 2.5.1 载体构建原理及PCR引物的设计 | 第25-27页 |
| 2.5.2 片段PCR、重叠PCR及其产物的纯化回收 | 第27-29页 |
| 2.5.3 目的片段与T载体的连接反应 | 第29页 |
| 2.5.4 大肠杆菌转化与筛选 | 第29-30页 |
| 2.5.5 菌液PCR鉴定与提取质粒送测序 | 第30-31页 |
| 2.5.6 目的片段与表达载体pCHF1的连接 | 第31页 |
| 2.5.7 大肠杆菌转化与筛选 | 第31-32页 |
| 2.5.8 菌液PCR鉴定与重组质粒的测序 | 第32页 |
| 2.5.9 农杆菌转化与抗性筛选 | 第32-33页 |
| 2.5.10 农杆菌阳性鉴定 | 第33页 |
| 2.6 生菜的转化与无菌组培 | 第33-34页 |
| 2.7 转化再生植株的RT-PCR阳性鉴定 | 第34-36页 |
| 2.8 转化再生植株的Northern blot阳性鉴定 | 第36-39页 |
| 2.8.1 放射性同位素P~(32)标记的Northern blot | 第36-38页 |
| 2.8.1.1 尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳与转膜 | 第36-37页 |
| 2.8.1.2 探针标记和杂交 | 第37-38页 |
| 2.8.2 非放射性地高辛标记的Northern blot | 第38-39页 |
| 2.8.2.1 凝胶电泳和转膜 | 第38页 |
| 2.8.2.2 探针标记和杂交 | 第38页 |
| 2.8.2.3 孵育抗体和化学发光 | 第38-39页 |
| 第三章 结果和分析 | 第39-58页 |
| 3.1 电泳结果与分析 | 第39-40页 |
| 3.1.1 片段PCR和重叠PCR的电泳结果 | 第39页 |
| 3.1.2 目的片段连到T载体上后菌液PCR鉴定结果 | 第39页 |
| 3.1.3 经Kpn Ⅰ和BamH Ⅰ酶切后的电泳结果 | 第39-40页 |
| 3.1.4 表达载体pCHF1转化农杆菌后菌液PCR的鉴定结果 | 第40页 |
| 3.2 表达载体质粒测序结果和分析 | 第40-46页 |
| 3.2.1 antiHCV系列表达载体质粒测序结果和分析 | 第41-43页 |
| 3.2.2 antiPGC系列表达载体质粒测序结果和分析 | 第43-46页 |
| 3.3 组培获得转化再生植株 | 第46-50页 |
| 3.4 转化再生植株的RT-PCR阳性鉴定的结果 | 第50-53页 |
| 3.4.1 antiHCV系列生菜的RT-PCR阳性鉴定 | 第50-51页 |
| 3.4.2 antiPGC系列生菜的RT-PCR阳性鉴定 | 第51-53页 |
| 3.5 转化再生植株的Northern blot阳性鉴定结果 | 第53-55页 |
| 3.5.1 antiHCV系列生菜Northern blot阳性鉴定 | 第53-54页 |
| 3.5.2 antiPGC系列生菜Northern blot阳性鉴定 | 第54-55页 |
| 3.6 antiPGC系列T2代生菜的Northern blot阳性鉴定结果 | 第55-58页 |
| 第四章 结论与展望 | 第58-60页 |
| 4.1 结论 | 第58页 |
| 4.2 展望 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
