| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第1章 前言 | 第8-28页 |
| 1.1 RNA质量控制系统概述 | 第8-10页 |
| 1.2 Exosome具体功能描述及物种间进化关系 | 第10-15页 |
| 1.3 Rrp44结构与功能 | 第15页 |
| 1.4 Exosome底物种类 | 第15-16页 |
| 1.5 Exosome内不同通路模型 | 第16-19页 |
| 1.6 细胞质内Exosome组份与功能 | 第19-21页 |
| 1.7 细胞核内Exosome组份与功能 | 第21-23页 |
| 1.8 电子显微镜及单颗粒重构的原理 | 第23-26页 |
| 1.8.1 电子显微镜的基本原理 | 第23-24页 |
| 1.8.2 单颗粒重构的基础假设 | 第24-25页 |
| 1.8.3 中心截面定理 | 第25-26页 |
| 1.9 单颗粒方法的常用流程 | 第26-28页 |
| 第2章 材料与方法 | 第28-48页 |
| 2.1 实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.2 实验耗材 | 第29-30页 |
| 2.3 重要生化试剂 | 第30-31页 |
| 2.4 实验缓冲液 | 第31-32页 |
| 2.5 构建的克隆载体汇总 | 第32-34页 |
| 2.6 酵母菌的培养和收集 | 第34-36页 |
| 2.7 Exosome的纯化方法 | 第36-38页 |
| 2.8 酵母遗传突变系统 | 第38-39页 |
| 2.8.1 材料 | 第38页 |
| 2.8.2 步骤 | 第38-39页 |
| 2.9 RNA体外转录及纯化系统 | 第39-40页 |
| 2.10 RNA体外重折叠 | 第40-41页 |
| 2.11 EMSA方法验证RNA与Exosome的结合活性 | 第41-42页 |
| 2.12 结合活性验证的pull down技术 | 第42页 |
| 2.13 交联质谱技术 | 第42-43页 |
| 2.14 负染样品制备及数据收集和处理 | 第43-44页 |
| 2.15 冷冻样品制备及数据收集和处理 | 第44-46页 |
| 2.16 电镜照片颗粒挑选 | 第46-48页 |
| 第3章 Rrp44-Exosome复合物内多条RNA降解通路 | 第48-68页 |
| 3.1 Rrp44-Exosome的内源纯化结果 | 第48-49页 |
| 3.2 针对过核降解通路和直接降解通路的RNA酶活性测试 | 第49-51页 |
| 3.3 Rrp44-Exosome在有无底物结合时存在多种构象 | 第51-56页 |
| 3.4 Rrp44-Exosome的RNA过核降解通道的电镜证据 | 第56-60页 |
| 3.5 Rrp44-Exosome中RNA直接降解通路的电镜证据 | 第60-63页 |
| 3.6 Rrp44-Exosome内RNA底物降解过程的电镜统计分析 | 第63-64页 |
| 3.7 tRNA在体外系统中走直接降解通路被降解 | 第64-68页 |
| 第4章 Rrp44-Exosome-Ski7复合物的结构解析 | 第68-92页 |
| 4.1 酵母内源Exo10-Ski7复合物的纯化和鉴定 | 第68-70页 |
| 4.2 Exo10-Ski7冷冻电镜重构 | 第70-74页 |
| 4.3 Exosome无底物状态分子模型构建 | 第74-76页 |
| 4.4 未结合RNA状态和结合RNA状态的Exo10-Ski7复合物的构象差异 | 第76-79页 |
| 4.5 Ski7和Exo10复合物的相互作用 | 第79-83页 |
| 4.6 RNA诱导下的两种构象的转换 | 第83-89页 |
| 4.7 Exo10-Ski7与核糖体相互作用初步探索 | 第89-92页 |
| 第5章 讨论与展望 | 第92-98页 |
| 5.1 Exosome的多条RNA降解通路的问题 | 第92-94页 |
| 5.2 Exosome与辅助因子的相互作用 | 第94-98页 |
| 参考文献 | 第98-109页 |
| 致谢 | 第109-112页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第112页 |
