| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-7页 |
| 英文缩略词对照表 | 第11-13页 |
| 1 绪论 | 第13-27页 |
| 1.1 问题的提出及研究意义 | 第13-14页 |
| 1.2 国内外现状研究 | 第14-24页 |
| 1.2.1 哮喘病的病理基础 | 第14-15页 |
| 1.2.2 气道平滑肌与哮喘病的关系 | 第15-21页 |
| 1.2.3 ADAM33与哮喘的关系 | 第21-24页 |
| 1.3 课题的研究目的及研究内容 | 第24-27页 |
| 1.3.1 课题的研究目的与意义 | 第24页 |
| 1.3.2 课题的研究内容 | 第24-25页 |
| 1.3.3 课题的技术路线 | 第25-26页 |
| 1.3.4 课题的特色及创新点 | 第26-27页 |
| 2 ADAM33表达影响ASMCs基础刚度、收缩能力、牵张力机制的初步探索 | 第27-61页 |
| 2.1 引言 | 第27-30页 |
| 2.2 主要实验材料与仪器设备 | 第30-32页 |
| 2.2.1 实验细胞来源 | 第30页 |
| 2.2.2 主要实验仪器 | 第30-31页 |
| 2.2.3 主要实验试剂 | 第31-32页 |
| 2.3 实验方法 | 第32-44页 |
| 2.3.1 SD大鼠原代气道平滑肌细胞的培养及鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3.2 用慢病毒转染并获得sADAM33超表达、ADAM33沉默以及阴性对照的气道平滑肌细胞 | 第33-34页 |
| 2.3.3 提取各组ASMCs的总RNA并用RT-PCR检测其中ADAM33以及收缩型和增值型标志蛋白的mRNA表达水平 | 第34-37页 |
| 2.3.4 提取各组ASMCs的总蛋白并用western blot检测其中ADAM33表达水平以及收缩型和增值型标志蛋白表达水平 | 第37-40页 |
| 2.3.5 提取各组ASMCs的培养上清液并测定其中sADAM33含量 | 第40页 |
| 2.3.6 验证条件培养基中过表达的sADAM33对对照组ASMCs的表型是否有调控作用 | 第40页 |
| 2.3.7 检测各组细胞Rho蛋白活性 | 第40-41页 |
| 2.3.8 检测ROCK是否参与sADAM33超表达的调控作用 | 第41-44页 |
| 2.3.9 数据处理与统计分析 | 第44页 |
| 2.4 实验结果 | 第44-56页 |
| 2.4.1 原代气道平滑肌细胞的培养及鉴定 | 第44-46页 |
| 2.4.2 用慢病毒转染并获得sADAM33超表达、ADAM33沉默以及阴性对照的气道平滑肌细胞 | 第46-50页 |
| 2.4.3 进行ADAM33调控以后各组ASMCs收缩态标志蛋白mRNA和蛋白的表达 | 第50-51页 |
| 2.4.4 测定各组ASMCs的培养上清液中sADAM33的相对含量 | 第51-52页 |
| 2.4.5 验证游离于培养基中的过量sADAM33是否对ASMCs表型具有调控作用 | 第52-53页 |
| 2.4.6 各组细胞Rho蛋白活性 | 第53-54页 |
| 2.4.7 ROCK抑制剂H1152对sADAM33超表达调控平滑肌力学影响 | 第54-56页 |
| 2.5 分析与讨论 | 第56-61页 |
| 3 ADAM33表达调控对ASMCs响应长期小幅拉伸刺激及大幅短暂拉伸的影响 | 第61-79页 |
| 3.1 引言 | 第61-64页 |
| 3.2 主要实验材料与仪器设备 | 第64-65页 |
| 3.2.1 实验细胞来源 | 第64页 |
| 3.2.2 主要实验仪器 | 第64-65页 |
| 3.2.3 主要实验试剂 | 第65页 |
| 3.3 实验方法 | 第65-71页 |
| 3.3.1 对pLV-ADAM33、sh-ADAM33、GFP三组气道平滑肌进行单轴应变加载 | 第65-67页 |
| 3.3.2 对三组ASMCs进行短暂大幅拉伸 | 第67-71页 |
| 3.4 实验结果 | 第71-75页 |
| 3.4.1 对三组气道平滑肌进行单轴应变加载 | 第71-73页 |
| 3.4.2 对三组气道平滑肌细胞进行短暂大幅拉伸 | 第73-75页 |
| 3.5 分析与讨论 | 第75-79页 |
| 4 ADAM33调控对ASMCs迁移以及粘附行为的影响 | 第79-91页 |
| 4.1 引言 | 第79页 |
| 4.2 主要实验材料与仪器设备 | 第79-81页 |
| 4.2.1 实验细胞来源 | 第79页 |
| 4.2.2 主要实验仪器 | 第79-80页 |
| 4.2.3 主要实验试剂 | 第80-81页 |
| 4.3 实验方法 | 第81-82页 |
| 4.3.1 利用活细胞工作站记录和分析各组细胞划痕迁移行为以及单细胞迁移行为 | 第81-82页 |
| 4.3.2 评价各组平滑肌细胞消化以后再粘附的能力 | 第82页 |
| 4.3.3 检测各组平滑肌细胞connexin以及integrin-β1蛋白的表达 | 第82页 |
| 4.4 实验结果 | 第82-89页 |
| 4.4.1 ADAM33调控对各组细胞划痕迁移行为以及单细胞迁移行为的影响 | 第82-86页 |
| 4.4.2 各组平滑肌细胞消化以后再粘附的能力 | 第86-88页 |
| 4.4.3 各组平滑肌细胞connexin以及integrin-β1蛋白的表达 | 第88-89页 |
| 4.5 分析与讨论 | 第89-91页 |
| 5 结论与展望 | 第91-95页 |
| 5.1 主要结论 | 第91-92页 |
| 5.2 后续工作展望 | 第92-95页 |
| 致谢 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-107页 |
| 附录 | 第107页 |
| A. 作者在攻读学位期间发表的论文目录 | 第107页 |
| B. 作者在攻读学位期间参加科研项目情况 | 第107页 |
