| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 引言 | 第12-18页 |
| 1.1 大黄鱼简介 | 第12页 |
| 1.2 大黄鱼病害 | 第12-13页 |
| 1.2.1 细菌性病害 | 第12页 |
| 1.2.2 病毒性病害 | 第12-13页 |
| 1.2.3 寄生虫性疾病 | 第13页 |
| 1.3 鱼类免疫系统 | 第13-14页 |
| 1.3.1 免疫组织和器官 | 第13-14页 |
| 1.3.2 细胞免疫 | 第14页 |
| 1.3.3 体液免疫 | 第14页 |
| 1.4 小G蛋白 | 第14-16页 |
| 1.4.1 Ras超家族 | 第15-16页 |
| 1.5 本研究的目的、内容及意义 | 第16-18页 |
| 第2章 大黄鱼Rac相关基因的表达与功能分析 | 第18-70页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-25页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第18页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 实验菌株和载体 | 第19页 |
| 2.1.4 引物 | 第19-20页 |
| 2.1.5 仪器设备 | 第20页 |
| 2.1.6 培养基配制 | 第20-21页 |
| 2.1.7 常用溶液配制 | 第21-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-39页 |
| 2.2.1 大黄鱼健康组织取样 | 第25页 |
| 2.2.2 LPS、poly I:C和副溶血弧菌免疫刺激和取样 | 第25页 |
| 2.2.3 组织总RNA提取 | 第25-26页 |
| 2.2.4 cDNA第一条链的合成及检测 | 第26-27页 |
| 2.2.5 lycRac1, lycRac2和lycRac3同源片段扩增与测序 | 第27-29页 |
| 2.2.6 生物信息学分析 | 第29页 |
| 2.2.7 lycRac1，lycRac2和lycRac3荧光定量PCR | 第29-30页 |
| 2.2.8 lycRac2原核表达及亚细胞定位 | 第30-37页 |
| 2.2.9 质粒提取和真核质粒构建 | 第37-38页 |
| 2.2.10 大黄鱼肾细胞培养 | 第38-39页 |
| 2.3 结果 | 第39-68页 |
| 2.3.1 RNA提取与cDNA检测 | 第39页 |
| 2.3.2 cDNA检测 | 第39-40页 |
| 2.3.3 lycRac1、lycRac2和lycRac3生物信息学分析 | 第40-53页 |
| 2.3.4 lycRac1、lycRac2和lycRac3的组织分布及免疫刺激后表达量的变化 | 第53-60页 |
| 2.3.5 lycRac2重组表达与纯化 | 第60-63页 |
| 2.3.6 lycRac2多克隆抗体的制备与检测 | 第63-64页 |
| 2.3.7 免疫电镜结果 | 第64-65页 |
| 2.3.8 真核质粒构建 | 第65-68页 |
| 2.4 讨论 | 第68-70页 |
| 第3章 大黄鱼Rab7基因的表达与功能分析 | 第70-91页 |
| 3.1 实验材料 | 第70-71页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第70页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第70页 |
| 3.1.3 实验载体和菌株 | 第70页 |
| 3.1.4 引物 | 第70-71页 |
| 3.1.5 仪器设备 | 第71页 |
| 3.1.6 培养基配制 | 第71页 |
| 3.1.7 常用溶液配制 | 第71页 |
| 3.2 实验方法 | 第71-73页 |
| 3.2.1 大黄鱼健康组织取样 | 第71页 |
| 3.2.2 LPS、poly I:C和副溶血弧菌免疫刺激和取样 | 第71-72页 |
| 3.2.3 组织总RNA提取 | 第72页 |
| 3.2.4 cDNA第一条链的合成及检测 | 第72页 |
| 3.2.5 lycRab7序列筛选及同源片段扩增 | 第72页 |
| 3.2.6 lycRab7生物信息学分析 | 第72页 |
| 3.2.7 lycRab7实时荧光定量PCR（qRT-PCR） | 第72页 |
| 3.2.8 lycRab7原核表达及蛋白纯化 | 第72-73页 |
| 3.2.9 抗lycRAB7多抗制备 | 第73页 |
| 3.2.10 酶联免疫吸附实验（ELISA）测定抗血清效价 | 第73页 |
| 3.2.11 Weatern-blot检测抗体特异性 | 第73页 |
| 3.3 结果 | 第73-89页 |
| 3.3.1 RNA提取及cDNA检测 | 第73页 |
| 3.3.2 lycRab7生物信息学分析 | 第73-80页 |
| 3.3.3 lycRab7的组织分布及免疫刺激后表达量的变化 | 第80-83页 |
| 3.3.4 lycRAB7重组蛋白表达、纯化和脱盐 | 第83-86页 |
| 3.3.5 lycRAB7多克隆抗体的制备与检测 | 第86-87页 |
| 3.3.6 lycRab7真核质粒构建 | 第87-89页 |
| 3.4 讨论 | 第89-91页 |
| 第4章 大黄鱼Rab5A免疫功能研究 | 第91-97页 |
| 4.1 实验材料 | 第91-92页 |
| 4.1.1 实验试剂 | 第91页 |
| 4.1.2 仪器设备 | 第91页 |
| 4.1.3 常用溶液配制 | 第91-92页 |
| 4.2 实验方法 | 第92-93页 |
| 4.2.1 重组质粒和空质粒诱导表达 | 第92页 |
| 4.2.2 重组蛋白活性检测 | 第92页 |
| 4.2.3 重组蛋白纯化 | 第92页 |
| 4.2.4 GST下拉 | 第92-93页 |
| 4.2.5 蛋白质质谱检测 | 第93页 |
| 4.3 结果 | 第93-96页 |
| 4.3.1 lycRAB5A融合蛋白诱导表达和纯化 | 第93-94页 |
| 4.3.2 GST下拉 | 第94-95页 |
| 4.3.3 lycRAB5A蛋白质质谱分析 | 第95-96页 |
| 4.4 讨论 | 第96-97页 |
| 第5章 结论、创新点与展望 | 第97-99页 |
| 5.1 研究结论 | 第97-98页 |
| 5.2 创新点 | 第98页 |
| 5.3 展望 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-106页 |
| 致谢 | 第106-107页 |
| 在学期间发表的学术论文 | 第107页 |
