| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| ·手性化合物简介 | 第11页 |
| ·制备手性化合物的方法 | 第11-12页 |
| ·酶法拆分手性药物 | 第11页 |
| ·酶催化手性药物合成 | 第11-12页 |
| ·生物催化简介 | 第12页 |
| ·腈水解酶的研究 | 第12-17页 |
| ·腈水解酶简介 | 第12-13页 |
| ·产腈水解酶的菌种以及植物 | 第13页 |
| ·腈水解酶的作用机制 | 第13-14页 |
| ·腈水解酶的选择性 | 第14-16页 |
| ·区域选择性 | 第14-15页 |
| ·立体选择性 | 第15-16页 |
| ·化学选择性 | 第16页 |
| ·腈水解酶的应用 | 第16-17页 |
| ·腈酶在工业中的应用 | 第16页 |
| ·腈酶在农业中的应用 | 第16-17页 |
| ·腈酶在有机合成中的应用 | 第17页 |
| ·重组大肠杆菌的研究 | 第17-18页 |
| ·响应面在微生物发酵培养基优化中的应用 | 第18-19页 |
| ·本课题研究的内容及意义 | 第19-21页 |
| 第二章 含腈水解酶基因的重组E.COLI PET21A-NIT的发酵优化 | 第21-38页 |
| ·引言 | 第21页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·微生物 | 第21页 |
| ·主要实验试剂 | 第21-22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-25页 |
| ·重组腈水解酶的培养 | 第23页 |
| ·OD值的测定 | 第23页 |
| ·酶活测定方法 | 第23页 |
| ·单因素实验 | 第23-24页 |
| ·碳源单因素实验 | 第23-24页 |
| ·氮源单因素实验 | 第24页 |
| ·金属离子单因素实验 | 第24页 |
| ·诱导条件单因素实验 | 第24页 |
| ·初始pH单因素实验 | 第24页 |
| ·温度单因素实验 | 第24页 |
| ·响应面设计 | 第24-25页 |
| ·Plackett-Burmen实验设计 | 第24页 |
| ·最陡爬坡实验 | 第24-25页 |
| ·Box-Behnken实验 | 第25页 |
| ·验证实验 | 第25页 |
| ·重组菌全细胞催化反应进程曲线的测定 | 第25页 |
| ·结果与讨论 | 第25-37页 |
| ·单因素实验结果 | 第25-31页 |
| ·碳源对重组腈水解酶生长以及产酶的影响 | 第25-26页 |
| ·氮源对重组腈水解酶生长以及产酶的影响 | 第26-28页 |
| ·金属离子对重组腈水解酶生长以及产酶的影响 | 第28页 |
| ·诱导剂对重组腈水解酶生长以及产酶的影响 | 第28-29页 |
| ·pH对重组腈水解酶生长以及产酶的影响 | 第29-30页 |
| ·温度对重组腈水解酶生长以及产酶的影响 | 第30-31页 |
| ·响应面设计 | 第31-36页 |
| ·PB实验结果 | 第31-33页 |
| ·最陡爬坡实验 | 第33页 |
| ·BB实验结果 | 第33-36页 |
| ·验证实验结果 | 第36页 |
| ·重组菌全细胞催化反应进程曲线的测定 | 第36-37页 |
| ·本章小结 | 第37-38页 |
| 第三章 含有腈水解酶基因的重组E.COLI PRSF-NIT2构建、双表达以及发酵优化 | 第38-52页 |
| ·引言 | 第38-39页 |
| ·实验材料 | 第39页 |
| ·微生物以及质粒 | 第39页 |
| ·主要实验试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-41页 |
| ·重组质粒的构建 | 第39页 |
| ·感受态细胞的制备与重组质粒的转化、鉴定 | 第39页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第39-40页 |
| ·重组E.coli/pRSF的培养 | 第40页 |
| ·细胞破碎 | 第40页 |
| ·蛋白纯化 | 第40页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第40页 |
| ·OD值的测定 | 第40-41页 |
| ·酶活测定方法 | 第41页 |
| ·重组腈水解酶产酶优化 | 第41页 |
| ·重组菌生长以及产酶曲线测定 | 第41页 |
| ·结果与讨论 | 第41-51页 |
| ·工程菌E.coli/pRSF的构造以及双表达 | 第41-43页 |
| ·目的基因在质粒MCS2上的表达 | 第41-42页 |
| ·目的基因在质粒MCS1上的表达 | 第42-43页 |
| ·重组腈水解酶的纯化结果 | 第43-44页 |
| ·重组菌发酵优化实验 | 第44-50页 |
| ·碳源对重组腈水解酶生长以及产酶的影响 | 第44-45页 |
| ·氮源对重组腈水解酶生长以及产酶的影响 | 第45-46页 |
| ·金属离子对重组腈水解酶生长以及产酶的影响 | 第46-47页 |
| ·诱导剂对重组腈水解酶生长以及产酶的影响 | 第47-48页 |
| ·pH对重组腈水解酶生长以及产酶的影响 | 第48-49页 |
| ·温度对重组腈水解酶生长以及产酶的影响 | 第49-50页 |
| ·重组菌生长以及产酶曲线测定 | 第50-51页 |
| ·本章小结 | 第51-52页 |
| 全文总结 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 硕士在读期间的科研成果 | 第60页 |