| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-18页 |
| ·线粒体的介绍 | 第10-11页 |
| ·线粒体的起源 | 第10页 |
| ·线粒体基因组的特点 | 第10-11页 |
| ·PPR蛋白的介绍 | 第11-15页 |
| ·PPR蛋白的定义 | 第11-12页 |
| ·PPR蛋白的分类 | 第12-13页 |
| ·PPR蛋白的功能 | 第13-15页 |
| ·PPR蛋白的工作机理 | 第15页 |
| ·模式生物——粟酒裂殖酵母 | 第15-16页 |
| ·本课题的研究内容和方法 | 第16-18页 |
| ·本课题的研究内容 | 第16页 |
| ·本课题的研究方法 | 第16-18页 |
| 第二章 粟酒裂殖酵母中Ppr10蛋白缺失后表型的研究 | 第18-23页 |
| ·实验材料 | 第18-19页 |
| ·所用菌株 | 第18页 |
| ·所用试剂及耗材 | 第18页 |
| ·培养基及试剂配制 | 第18-19页 |
| ·实验方法 | 第19页 |
| ·测定生长曲线 | 第19页 |
| ·△ppr10菌株对抗霉素A的敏感性实验 | 第19页 |
| ·实验结果与分析 | 第19-21页 |
| ·yHL6381野生型菌株和Δppr10菌株的生长曲线测定 | 第19-20页 |
| ·△ppr10菌株对抗霉素A的敏感性研究 | 第20-21页 |
| ·讨论 | 第21-23页 |
| 第三章 粟酒裂殖酵母中Ppr10蛋白在细胞中的定位 | 第23-35页 |
| ·实验材料 | 第23-25页 |
| ·所用菌株 | 第23页 |
| ·所用试剂及耗材 | 第23-25页 |
| ·实验方法 | 第25-29页 |
| ·酵母线粒体的粗提取 | 第25-26页 |
| ·酵母线粒体的精提取 | 第26-27页 |
| ·超速离心的步骤 | 第27页 |
| ·分离线粒体的膜蛋白与可溶性蛋白(碱处理) | 第27页 |
| ·TritonX-100和蛋白酶K处理线粒体实验 | 第27-28页 |
| ·免疫印迹分析实验(western blot) | 第28-29页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第28页 |
| ·转膜、封闭、抗体的孵育以及信号的检测 | 第28-29页 |
| ·实验结果与分析 | 第29-34页 |
| ·Ppr10蛋白的定位于线粒体的信号肽(MTS)分析 | 第29-30页 |
| ·粟酒裂殖酵母线粒体的质量控制 | 第30-31页 |
| ·Ppr10蛋白在酵母细胞中的定位 | 第31-32页 |
| ·Ppr10蛋白在酵母线粒体中的定位 | 第32-34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| 第四章 粟酒裂殖酵母Ppr10蛋白对线粒体蛋白水平的影响 | 第35-38页 |
| ·实验材料 | 第35页 |
| ·所用菌株 | 第35页 |
| ·所用试剂及耗材 | 第35页 |
| ·试剂配制 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35页 |
| ·实验结果 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-38页 |
| 第五章 粟酒裂殖酵母Ppr10蛋白对核基因组编码的线粒体蛋白Cox4水平的影响 | 第38-52页 |
| ·实验材料 | 第38-40页 |
| ·所用菌株与质粒 | 第38-39页 |
| ·所用试剂与耗材 | 第39页 |
| ·培养基与试剂配制 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-46页 |
| ·引物的设计 | 第40页 |
| ·粟酒裂殖酵母yHL6381总RNA的提取 | 第40-41页 |
| ·cDNA的获得 | 第41页 |
| ·原核表达载体pET-28a(+)/cox4的构建 | 第41-45页 |
| ·目的蛋白Cox4的表达 | 第45页 |
| ·目标蛋白Cox4的纯化 | 第45-46页 |
| ·Cox4蛋白抗体制备与的检测 | 第46页 |
| ·8 粟酒裂殖酵母Ppr10蛋白对线粒体蛋白水平的影响 | 第46页 |
| ·实验结果 | 第46-51页 |
| ·原核表达载体pET-28a(+)/cox4的构建 | 第46-48页 |
| ·目的蛋白Cox4的表达与纯化 | 第48-49页 |
| ·Cox4蛋白抗体的制备及检测 | 第49-50页 |
| ·Ppr10蛋白对线粒体蛋白Cox4水平的影响 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-52页 |
| 第六章 粟酒裂殖酵母Ppr10蛋白对线粒体蛋白翻译的影响 | 第52-60页 |
| ·实验材料 | 第52-53页 |
| ·所用菌株 | 第52页 |
| ·所用试剂及耗材 | 第52页 |
| ·试剂配制 | 第52-53页 |
| ·实验方法 | 第53-55页 |
| ·[~(35)S]-Protein Labeling Mix标记按时间梯度标记S.pombe线粒体蛋白质 | 第53-54页 |
| ·[~(35)S]-Protein Labeling Mix标记yHL6381、△ppr4菌株和△ppr10菌株线粒体蛋白质 | 第54-55页 |
| ·实验结果 | 第55-58页 |
| ·[~(35)S]-Protein Labeling Mix标记S.pombe线粒体蛋白质与时间的关系 | 第55-56页 |
| ·[~(35)S]-Protein Labeling Mix标记yHL6381、△ppr4菌株和△ppr10菌株线粒体蛋白质 | 第56-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 全文总结 | 第60-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 实验仪器 | 第67-69页 |
| 菌种 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
