| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-13页 |
| ·线粒体结构特点及功能 | 第8-10页 |
| ·线粒体与人类疾病 | 第10页 |
| ·线粒体蛋白的研究进展 | 第10-11页 |
| ·模式生物——粟酒裂殖酵母 | 第11-12页 |
| ·展望 | 第12-13页 |
| 第二章 粟酒裂殖酵母Mpa1定位的研究 | 第13-21页 |
| ·实验材料 | 第13-15页 |
| ·菌种和质粒 | 第13页 |
| ·培养基以及相关试剂 | 第13-15页 |
| ·实验方法 | 第15-18页 |
| ·粟酒裂殖酵母线粒体的粗提 | 第15-16页 |
| ·粟酒裂殖酵母线粒体的细提 | 第16页 |
| ·TritonX-100和蛋白酶K处理线粒体实验 | 第16-17页 |
| ·碱处理分离线粒体的膜蛋白与可溶性 | 第17页 |
| ·Western Blot检测 | 第17-18页 |
| ·实验结果 | 第18-20页 |
| ·Mpal定位在线粒体 | 第18页 |
| ·Mpal并不驻留在线粒体外膜 | 第18-19页 |
| ·Mpal定位在线粒体基质中 | 第19-20页 |
| ·本章小结 | 第20-21页 |
| 第三章 粟酒裂殖酵母Mpa1相关功能的研究 | 第21-47页 |
| ·实验材料 | 第22-26页 |
| ·菌种和质粒 | 第22页 |
| ·培养基与相关试剂 | 第22-26页 |
| ·实验方法 | 第26-37页 |
| ·重组质粒的构建 | 第27-31页 |
| ·mpal基因缺失突变株的构建及验证 | 第31-35页 |
| ·野生型及yZQ1酵母细胞生长曲线的测定 | 第35页 |
| ·野生型及yZQ1酵母细胞形态的观察 | 第35-36页 |
| ·基因缺失突变体不同生长阶段的点圈实验 | 第36页 |
| ·基因缺失突变体在非发酵培养基上的点圈实验 | 第36-37页 |
| ·yZQ1对抗霉素A的敏感性实验 | 第37页 |
| ·yZQ1中线粒体表达蛋白量的检测 | 第37页 |
| ·实验结果 | 第37-46页 |
| ·mpa1-del-G418重组质粒的构建 | 第37-38页 |
| ·yZQ1的构建及验证 | 第38-42页 |
| ·yZQ1的生长速率低于野生型菌株 | 第42-43页 |
| ·yZQ1形态发生变化 | 第43页 |
| ·yZQ1存活率显著降低 | 第43-44页 |
| ·yZQ1表现出生长缺陷 | 第44-45页 |
| ·yZQ1对抗霉素A表现出极度敏感性 | 第45页 |
| ·mpa1基因的缺失导致线粒体蛋白质表达量下降 | 第45-46页 |
| ·本章小结 | 第46-47页 |
| 第四章 自身调控序列回补yZQ1及Mpa1功能位点的确定 | 第47-60页 |
| ·实验材料 | 第47-48页 |
| ·菌种和质粒 | 第47-48页 |
| ·培养基以及相关试剂 | 第48页 |
| ·实验方法 | 第48-54页 |
| ·引物设计及质粒构建示意图 | 第48-49页 |
| ·重组质粒的构建 | 第49-53页 |
| ·pJK148酶切之后LiAc转化yHL6381和yZQ1菌株 | 第53页 |
| ·重组质粒目的片段转化yZQ1菌株 | 第53页 |
| ·自身调控序列回补菌的点圈实验 | 第53页 |
| ·自身调控序列回补菌的蛋白表达检测 | 第53-54页 |
| ·碱裂解法抽提总蛋白及蛋白表达的检测 | 第54页 |
| ·缺失特定区域的回补菌株的点圈实验 | 第54页 |
| ·实验结果 | 第54-59页 |
| ·重组质粒的构建 | 第54-55页 |
| ·自身调控序列回补菌株可以正常生长 | 第55-56页 |
| ·自身调控序列回补菌株可以正常表达Mpa1蛋白 | 第56-57页 |
| ·自身调控序列回补菌株中线粒体蛋白正常表达 | 第57页 |
| ·特定区域缺失的菌株在非发酵培养基上表现出生长缺陷 | 第57-58页 |
| ·不同区域截短的菌株中Mpa1蛋白可以正常表达 | 第58-59页 |
| ·本章小结 | 第59-60页 |
| 第五章 全文总结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 附录一 主要仪器 | 第66-67页 |
| 附录二 本实验所用的质粒 | 第67-68页 |
| 附录三 本实验所用的菌种 | 第68-70页 |
| 在读期间发表的学术论文和获得奖励 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
