| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-16页 |
| 第1章 绪论 | 第16-31页 |
| ·选题意义 | 第16页 |
| ·漆酶国内外研究现状 | 第16-29页 |
| ·漆酶的来源 | 第16-19页 |
| ·漆酶基因的克隆和异源表达 | 第19-22页 |
| ·漆酶的结构 | 第22-24页 |
| ·漆酶的催化机制 | 第24-26页 |
| ·漆酶的应用 | 第26-29页 |
| ·研究目的和研究内容 | 第29-31页 |
| ·研究目的 | 第29-30页 |
| ·研究内容 | 第30-31页 |
| 第2章 漆酶产生菌株的筛选、鉴定及发酵优化 | 第31-56页 |
| ·实验材料 | 第31-34页 |
| ·筛选样本 | 第31页 |
| ·培养基 | 第31页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第31-34页 |
| ·实验方法 | 第34-38页 |
| ·产漆酶真菌的筛选 | 第34页 |
| ·漆酶产生菌株的显微形态观察 | 第34页 |
| ·漆酶产生菌株的分子生物学鉴定 | 第34-36页 |
| ·发酵种子液的制备 | 第36页 |
| ·漆酶摇瓶发酵条件优化 | 第36页 |
| ·酶活力测定 | 第36页 |
| ·漆酶的SDS-PAGE分析 | 第36-37页 |
| ·漆酶的酶性质研究 | 第37-38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-54页 |
| ·产漆酶菌株筛选 | 第38-41页 |
| ·产漆酶菌株分子生物学鉴定 | 第41-45页 |
| ·漆酶发酵条件优化 | 第45-50页 |
| ·漆酶的SDS-PAGE分析 | 第50页 |
| ·漆酶的酶学性质研究 | 第50-54页 |
| ·小结 | 第54-56页 |
| 第3章 棘孢木霉漆酶基因的克隆及生物信息学分析 | 第56-81页 |
| ·实验材料 | 第56页 |
| ·菌株和培养基 | 第56页 |
| ·试剂和仪器 | 第56页 |
| ·实验方法 | 第56-61页 |
| ·菌株的培养与菌丝体的处理 | 第56-57页 |
| ·棘孢木霉基因组DNA和总RNA的提取 | 第57页 |
| ·棘孢木霉lac1、lac2和lac3基因的克隆 | 第57-58页 |
| ·大肠杆菌DH5α感受态的制备 | 第58-59页 |
| ·lac1、lac2、lac3基因与pUCm-T质粒的连接和转化 | 第59-60页 |
| ·阳性克隆子的筛选、验证和测序 | 第60-61页 |
| ·生物信息学分析和同源建模 | 第61页 |
| ·结果与讨论 | 第61-80页 |
| ·棘孢木霉基因组DNA和总RNA的提取 | 第61-62页 |
| ·棘孢木霉mRNA的纯化和cDNA单链的合成 | 第62-63页 |
| ·lac1、lac2和lac3基因的克隆 | 第63-65页 |
| ·基因与pUCm-T载体的连接、转化和阳性克隆子的筛选 | 第65-70页 |
| ·漆酶蛋白质序列分析 | 第70-75页 |
| ·Lac的同源建模分析 | 第75-80页 |
| ·小结 | 第80-81页 |
| 第4章 漆酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第81-92页 |
| ·实验材料 | 第81-82页 |
| ·菌株和载体 | 第81页 |
| ·培养基 | 第81页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第81-82页 |
| ·实验方法 | 第82-86页 |
| ·表达载体的构建 | 第82-84页 |
| ·转化子筛选及验证 | 第84页 |
| ·重组质粒的线性化 | 第84-85页 |
| ·毕赤轉母GS115感受态的制备 | 第85页 |
| ·线性化后质粒电转化至毕赤醇母感受态细胞 | 第85-86页 |
| ·毕赤醉母重组子的筛选及毕赤酵母基因组PCR验证 | 第86页 |
| ·重组菌株的诱导表达 | 第86页 |
| ·漆酶活的测定及定义 | 第86页 |
| ·SDS-PAGE聚丙捕醜胺凝胶电泳分析 | 第86页 |
| ·结果与讨论 | 第86-91页 |
| ·PPIC9K质粒的提取 | 第86-87页 |
| ·lac1和lac3基因的扩增 | 第87页 |
| ·pPIC9K与目的基因的双酶切、连接 | 第87-88页 |
| ·转化子筛选及酶切验证 | 第88页 |
| ·重组质粒的SacI线性化 | 第88-89页 |
| ·重组质粒的电转化毕赤酵母 | 第89页 |
| ·毕赤酷母重组子的筛选 | 第89-90页 |
| ·毕赤酵母重组子的PCR验证 | 第90页 |
| ·毕赤黯母重组菌的发醇 | 第90-91页 |
| ·重组菌诱导分泌漆酶的SDS-PAGE分析 | 第91页 |
| ·小结 | 第91-92页 |
| 第5章 结论与展望 | 第92-94页 |
| ·结论 | 第92-93页 |
| ·展望 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-106页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107页 |