| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-16页 |
| 第1章 绪论 | 第16-28页 |
| ·选题意义 | 第16-17页 |
| ·纤维素及纤维素酶的研究现状 | 第17-20页 |
| ·纤维素 | 第17-18页 |
| ·纤维素酶的开发研究概况 | 第18-19页 |
| ·纤维素酶的应用 | 第19-20页 |
| ·外切葡聚糖酶(CBH)的研究进展 | 第20-26页 |
| ·CBH的克隆表达研究进展 | 第20-21页 |
| ·CBH结构与功能的研究 | 第21页 |
| ·CBH催化水解及分子设计的研究 | 第21-22页 |
| ·CBH作用机理 | 第22-23页 |
| ·CBH的结构与家族分类 | 第23-26页 |
| ·CBH酶的纯化方法研究 | 第26页 |
| ·研究目的及内容 | 第26-28页 |
| ·研究目的 | 第26-27页 |
| ·研究内容 | 第27-28页 |
| 第2章 匍枝根霉CBH基因的克隆及分析 | 第28-48页 |
| ·实验材料 | 第28-29页 |
| ·菌株和培养基 | 第28-29页 |
| ·试剂和仪器 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-37页 |
| ·菌株的培养与菌丝体的处理 | 第29-30页 |
| ·匍枝根霉DNA和总RNA的提取 | 第30-32页 |
| ·匍枝根霉cDNA单链的合成 | 第32页 |
| ·匍枝根霉cbh1和cbh2基因的筛选 | 第32-34页 |
| ·E.coli DH5α感受态的制备 | 第34页 |
| ·cbh1、cbh2基因与pUCM-T载体的连接和转化 | 第34-35页 |
| ·阳性克隆子的筛选、验证和测序 | 第35-36页 |
| ·生物信息学分析和纤维二糖水解酶同源建模 | 第36-37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-46页 |
| ·匍枝根霉DNA和总RNA的提取 | 第37-38页 |
| ·匍枝根霉mRNA的纯化和cDNA单链的合成 | 第38-39页 |
| ·cbh1、cbh2基因的筛选 | 第39页 |
| ·基因与pUCM-T载体的连接、转化和阳性克隆子的筛选 | 第39页 |
| ·纤维二糖水解酶(CBH)序列分析 | 第39-43页 |
| ·CBH同源建模和分析研究 | 第43-46页 |
| ·小结 | 第46-48页 |
| 第3章 匍枝根霉纤维二糖水解酶(CBH)的原核表达 | 第48-61页 |
| ·实验材料 | 第48-49页 |
| ·菌株、载体、试剂 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48-49页 |
| ·引物设计 | 第49页 |
| ·试验方法 | 第49-52页 |
| ·pET22(b)载体的提取 | 第49-50页 |
| ·cbh1、cbh2基因的扩增 | 第50页 |
| ·cbh1、cbh2重组质粒的构建 | 第50-51页 |
| ·重组菌的构建 | 第51页 |
| ·阳性克隆子的筛选、验证 | 第51页 |
| ·cbh1、cbh2重组菌发酵性能筛选 | 第51页 |
| ·CBH酶活测定方法及葡萄糖标准曲线的制备 | 第51-52页 |
| ·SDS-PAGE分析重组菌的表达 | 第52页 |
| ·重组菌发酵优化 | 第52页 |
| ·结果与讨论 | 第52-59页 |
| ·重组质粒的构建 | 第52-54页 |
| ·大肠杆菌BL21感受态的制备和转化 | 第54页 |
| ·阳性克隆子的筛选、验证 | 第54-55页 |
| ·重组菌的产酶筛选 | 第55页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第55-56页 |
| ·重组菌诱导发酵 | 第56-59页 |
| ·小结 | 第59-61页 |
| 第4章 重组菌产CBH酶的分离纯化及酶特性研究 | 第61-76页 |
| ·实验材料 | 第61-63页 |
| ·菌株和培养基 | 第61页 |
| ·试剂和仪器 | 第61-63页 |
| ·试验方法 | 第63-67页 |
| ·蛋白质标准曲线的建立及蛋白质含量的测定 | 第63页 |
| ·放大发酵重组菌 | 第63-64页 |
| ·CBH粗酶液的制备 | 第64页 |
| ·纤维二糖水解酶的分离纯化 | 第64-65页 |
| ·SDS-PAGE凝胶分析 | 第65-66页 |
| ·酶学特性分析 | 第66-67页 |
| ·结果与讨论 | 第67-75页 |
| ·BSA标准曲线的绘制 | 第67页 |
| ·重组菌的发酵、收集菌体和粗酶液制备 | 第67页 |
| ·纤维二糖水解酶的分离纯化 | 第67-69页 |
| ·SDS-PAGE分析纯化样品 | 第69-70页 |
| ·酶学特性分析 | 第70-75页 |
| ·小结 | 第75-76页 |
| 第5章 结论与展望 | 第76-79页 |
| ·结论 | 第76-77页 |
| ·展望 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-90页 |
| 附录 | 第90-96页 |
| 攻读硕士期间发表论文 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97页 |
