| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略语表（ABBREVIATION） | 第11-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-22页 |
| ·猪圆环病毒概述 | 第12-14页 |
| ·猪圆环病毒的基因组结构及其理化特性 | 第14-15页 |
| ·猪圆环病毒的转录产物 | 第15页 |
| ·猪圆环病毒编码的开放阅读框（ORF） | 第15-19页 |
| ·滚环复制过程机制 | 第19-20页 |
| ·其他病毒Rep蛋白多聚体研究进展 | 第20-22页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 第3章 材料与方法 | 第23-43页 |
| ·实验材料 | 第23-27页 |
| ·菌种、质粒和细胞 | 第23页 |
| ·主要药品及试剂（盒） | 第23-24页 |
| ·主要培养基及抗生素和诱导剂的配制 | 第24页 |
| ·缓冲液 | 第24-26页 |
| ·50×TAE缓冲液 | 第24页 |
| ·0.8%琼脂糖凝胶 | 第24页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）缓冲液 | 第24-25页 |
| ·非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native-PAGE）缓冲液 | 第25页 |
| ·蛋白纯化缓冲液及其他相关缓冲液 | 第25-26页 |
| ·Western-blot缓冲液的配制 | 第26页 |
| ·解旋反应相关缓冲液的配制 | 第26页 |
| ·引物设计 | 第26-27页 |
| ·荧光底物 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-43页 |
| ·目的基因的扩增 | 第27页 |
| ·目的片段的回收 | 第27-28页 |
| ·目的片段的连接 | 第28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| ·连接产物的转化 | 第29页 |
| ·质粒的提取与酶切鉴定 | 第29-32页 |
| ·质粒的少量提取 | 第29-30页 |
| ·质粒的大量提取 | 第30-32页 |
| ·质粒的酶切鉴定 | 第32页 |
| ·表达质粒的构建与鉴定 | 第32-33页 |
| ·质粒的双酶切与回收 | 第32页 |
| ·目的片段与表达载体的连接与转化 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的提取与酶切鉴定 | 第33页 |
| ·重组表达菌株的构建 | 第33页 |
| ·重组菌的表达与鉴定 | 第33-36页 |
| ·重组蛋白在E.coli中可溶性表达 | 第33-34页 |
| ·SDS-PAGE检测 | 第34页 |
| ·Western blot鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第35页 |
| ·可溶性蛋白的纯化及鉴定 | 第35-36页 |
| ·BCA法测定蛋白浓度 | 第36-37页 |
| ·利用凝胶过滤层析（分子筛）纯化蛋白质 | 第37-38页 |
| ·Rep蛋白解旋酶活性的测定 | 第38页 |
| ·细胞的复苏、传代、冻存 | 第38-39页 |
| ·细胞的复苏 | 第38页 |
| ·细胞的传代 | 第38-39页 |
| ·细胞的冻存 | 第39页 |
| ·细胞转染 | 第39页 |
| ·海肾荧光素酶活性检测 | 第39-40页 |
| ·细胞总DNA的提取 | 第40-41页 |
| ·荧光定量PCR | 第41页 |
| ·间接免疫荧光（IFA） | 第41-42页 |
| ·蛋白质结晶条件的筛选 | 第42-43页 |
| 第4章 结果与分析 | 第43-61页 |
| ·PCV2 Rep基因的扩增 | 第43页 |
| ·重组质粒pET28a-SUMO-Rep的双酶切鉴定 | 第43-44页 |
| ·SUMO-Rep融合蛋白的纯化及Western blot验证 | 第44-45页 |
| ·SUMO-Rep融合蛋白SUMO标签的去除及Rep蛋白的纯化 | 第45-47页 |
| ·Rep蛋白突变体对蛋白多聚化的影响 | 第47-52页 |
| ·Rep突变体真核及原核表达质粒的构建 | 第47-49页 |
| ·Rep蛋白突变体在真核细胞中对蛋白多聚化的影响 | 第49-50页 |
| ·Rep蛋白突变体对原核表达的蛋白多聚化的影响 | 第50-52页 |
| ·Rep突变体对复制子复制的影响 | 第52-58页 |
| ·PCV2复制子突变体的构建 | 第52-57页 |
| ·含有 2A序列的Rep基因突变体的构建 | 第52-54页 |
| ·pcDNA3.1-Rluc-Rep突变体质粒的构建 | 第54-55页 |
| ·ori-PCMV-Rluc-Rep突变体片段的扩增 | 第55-56页 |
| ·pT-ori-ORF1复制子突变体的构建 | 第56-57页 |
| ·Rep突变体对复制子复制率的影响 | 第57-58页 |
| ·Rep突变体对复制子海肾荧光素酶活性的影响 | 第58页 |
| ·Rep突变体对蛋白解旋酶活性的影响 | 第58-60页 |
| ·Rep蛋白晶体的初步筛选 | 第60-61页 |
| 第5章 讨论与结论 | 第61-64页 |
| ·讨论 | 第61-63页 |
| ·结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
