摘要 | 第1-8页 |
Abstract | 第8-10页 |
缩略语表(Abbreviation) | 第10-13页 |
第1章 文献综述 | 第13-30页 |
·猪传染性胃肠炎简介 | 第13-18页 |
·TGEV的基因组特征及复制转录机制 | 第13-14页 |
·冠状病毒编码蛋白简介 | 第14-17页 |
·转录复制中心模式概述 | 第17-18页 |
·天然免疫概述 | 第18-27页 |
·天然免疫简介 | 第18页 |
·PAMP简介 | 第18-19页 |
·模式识别受体识别PAMP | 第19-21页 |
·模式识别受体介导信号转导 | 第21-23页 |
·I型IFN免疫应答系统 | 第23-24页 |
·IFN-β 转录激活机制 | 第24-26页 |
·I型IFN诱导抗病毒效应分子 | 第26-27页 |
·DExD/H-box解旋酶 | 第27-30页 |
·DExD/H-box解旋酶的结构 | 第27页 |
·DExD/H-box解旋酶的功能 | 第27-30页 |
第2章 研究目的和意义 | 第30-31页 |
第3章 材料与方法 | 第31-43页 |
·实验材料 | 第31-34页 |
·细胞、毒株 | 第31页 |
·载体与质粒 | 第31-32页 |
·主要试剂 | 第32页 |
·抗体及Western blot所需实验材料 | 第32页 |
·细胞培养基及其配置 | 第32-33页 |
·主要缓冲液与相关试剂及其配置 | 第33-34页 |
·其他缓冲液及试剂 | 第34页 |
·主要实验仪器及设备 | 第34页 |
·分子生物学信息软件 | 第34页 |
·实验方法 | 第34-43页 |
·目的基因重组质粒的构建 | 第34-35页 |
·PCR产物或酶切产物的回收与纯化 | 第35页 |
·限制性内切酶酶切反应 | 第35-36页 |
·外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第36页 |
·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第36页 |
·连接产物的转化 | 第36页 |
·重组质粒的制备与鉴定 | 第36-37页 |
·质粒的大量制备 | 第37页 |
·质粒DNA的定量 | 第37页 |
·干扰分子设计及合成 | 第37-38页 |
·质粒及siRNA的转染(脂质体介导转染法) | 第38页 |
·双荧光素酶检测实验 | 第38页 |
·猪传染性胃肠炎病毒的增殖 | 第38页 |
·病毒滴度的测定 | 第38-39页 |
·RNA的提取及实时荧光定量RT-PCR | 第39页 |
·cDNA的合成 | 第39-40页 |
·SYBR Green I实时荧光定量PCR | 第40页 |
·Western blot实验 | 第40-41页 |
·Co-IP实验 | 第41-42页 |
·间接免疫荧光实验与激光共聚焦显微镜观察 | 第42页 |
·统计学方法 | 第42-43页 |
第4章 结果与分析 | 第43-54页 |
·TGEV激活IFN-β | 第43页 |
·TGEV nsp14显著激活IFN-β | 第43-45页 |
·nsp14诱导NF-κB的分子机制 | 第45-47页 |
·TGEV nsp14激活IFN-β 的信号通路机制研究 | 第47-50页 |
·TGEV nsp14与DDX1蛋白相互作用 | 第48-49页 |
·TGEV nsp14通过DDX1诱导宿主免疫 | 第49-50页 |
·TGEV通过DDX1受体诱导宿主免疫 | 第50-51页 |
·DDX1抑制TGEV增殖 | 第51-52页 |
·TGEV感染对DDX1的影响 | 第52-54页 |
·TGEV感染对DDX1表达的影响 | 第52-53页 |
·TGEV感染对DDX1定位的影响 | 第53-54页 |
第5章 讨论与结论 | 第54-58页 |
·讨论 | 第54-57页 |
·TGEV激活IFN-β 的分子机制初步探讨 | 第54-55页 |
·TGEV nsp14激活IFN-β 的分子机制研究 | 第55页 |
·TGEV通过DDX1诱导抗病毒反应的分子机制研究 | 第55-56页 |
·DDX1对TGEV增殖的影响初步探讨 | 第56页 |
·TGEV对DDX1表达与定位影响的生物学意义探讨 | 第56-57页 |
·结论 | 第57-58页 |
参考文献 | 第58-66页 |
致谢 | 第66页 |